Quan es pipetegen volums de 0,2 a 5 µL, la precisió i la precisió del pipet són de la màxima importància, una bona tècnica de pipeteig és essencial perquè els errors de manipulació són més evidents amb volums petits.
A mesura que s'està centrant més en la reducció de reactius i costos, hi ha una gran demanda de volums més petits, per exemple, per a la preparació de PCR Mastermix o reaccions enzimàtiques.Però pipetar volums petits de 0,2 a 5 µL planteja nous reptes per a la precisió i la precisió del pipeteig.Els punts següents són essencials:
- Mida de la pipeta i la punta: trieu sempre la pipeta amb el volum nominal més baix possible i la punta més petita per mantenir el coixí d'aire el més petit possible.Quan pipeteu 1 µL, per exemple, trieu una pipeta de 0,25-2,5 µL i una punta que coincideixi en lloc d'una pipeta d'1-10 µL.
- Calibratge i manteniment: és fonamental que les vostres pipetes estiguin correctament calibrades i mantingudes.Els petits ajustos i les peces trencades en una pipeta provoquen un augment massiu dels valors d'error sistemàtics i aleatoris.Un calibratge segons la norma ISO 8655 s'ha de fer un cop l'any.
- Pipetes de desplaçament positiu: comproveu si teniu una pipeta de desplaçament positiu amb un rang de volum baix al vostre laboratori.En general, l'ús d'aquest tipus de pipeta condueix a un millor resultat de pipeta en termes d'exactitud i precisió que amb les pipetes clàssiques de coixí d'aire.
- Intenteu utilitzar volums més grans: podeu considerar diluir la vostra mostra per pipetar volums més grans amb la mateixa quantitat en la reacció final.Això pot reduir els errors de pipeteig amb volums de mostra molt petits.
A més d'una bona eina, l'investigador ha de tenir una molt bona tècnica de pipeteig.Presteu especial atenció als passos següents:
- Enganxament de la punta: no encaixeu la pipeta a la punta, ja que això pot danyar l'extrem de la punta fina i provocar que el feix de líquid es redirigeixi o danyar l'orifici.Només apliqueu una lleugera pressió quan connecteu una punta i utilitzeu una pipeta amb un con de punta amb molla.
- Sostenint la pipeta: No agafeu la pipeta a la mà mentre espereu la centrífuga, el ciclador, etc. L'interior de la pipeta s'escalfarà i farà que el coixí d'aire s'expandeixi, provocant desviacions del volum establert en pipetejar.
- Pre-humectació: La humidificació de l'aire a l'interior de la punta i la pipeta prepara la punta per a la mostra i evita l'evaporació en aspirar el volum de transferència.
- Aspiració vertical: Això és molt important quan es manipulen petits volums per evitar l'efecte capil·lar que es produeix quan la pipeta es manté en angle.
- Profunditat d'immersió: Submergeix la punta el menys possible per evitar que el líquid entri a la punta a causa de l'efecte capil·lar.Regla general: com més petit sigui la punta i el volum, menor serà la profunditat d'immersió.Recomanem un màxim de 2 mm quan pipeteu volums petits.
- Dispensació amb un angle de 45°: es garanteix un flux òptim del líquid quan la pipeta es manté en un angle de 45°.
- Contacte amb la paret del recipient o la superfície del líquid: només es poden dispensar correctament volums petits quan la punta es subjecta contra la paret del recipient o submergida en líquid.Fins i tot l'última gota de la punta es pot dispensar amb precisió.
- Bufat: és obligatori un bufat després de dispensar volums baixos per dispensar fins i tot l'última gota de líquid present a la punta.L'explosió també s'ha de dur a terme contra la paret del vaixell.Aneu amb compte de no introduir bombolles d'aire a la mostra quan feu un bufat a la superfície del líquid.
Hora de publicació: 18-feb-2021