Како да се пипетираат мали волумени со рачни пипети

Бидејќи се повеќе се фокусира на намалување на реагенсите и трошоците, помалите количини се во голема побарувачка, на пр. за подготовка на PCR Mastermix или ензимски реакции. Но, пипетирањето мали количини од 0,2 – 5 µL поставува нови предизвици за точноста и прецизноста на пипетирањето. Следните точки се од суштинско значење:

1. Големина на пипета и врв: Секогаш избирајте ја пипетата со најмал можен номинален волумен и најмал врв за да го одржите воздушното перниче што е можно помало. При пипетирање од 1 µL, на пр., изберете пипета од 0,25 – 2,5 µL и соодветен врв, наместо пипета од 1 – 10 µL.
2. Калибрација и одржување: Од суштинско значење е вашите пипети да бидат правилно калибрирани и одржувани. Малите прилагодувања и скршените делови на пипетата доведуваат до масовно зголемување на систематските и случајните вредности на грешки. Калибрацијата според ISO 8655 мора да се врши еднаш годишно.
3. Пипети со позитивно поместување: Проверете дали во вашата лабораторија имате пипета со позитивно поместување со низок опсег на волумен. Општо земено, користењето на овој тип пипета води до подобар резултат од пипетирањето во однос на точноста и прецизноста отколку со класичните пипети со воздушно перниче.
4. Обидете се да користите поголеми волумени: Можете да размислите за разредување на вашиот примерок за да пипетирате поголеми волумени со иста количина во конечната реакција. Ова може да ги намали грешките при пипетирање со многу мали волумени на примерокот.

Покрај добра алатка, истражувачот мора да има и многу добра техника на пипетирање. Обрнете посебно внимание на следните чекори:

1. Прикачување на врвот: Не ја заглавувајте пипетата на врвот бидејќи тоа може да го оштети финиот крај, да предизвика пренасочување на течниот сноп или да го оштети отворот. Прикачувајте го врвот само со лесен притисок и користете пипета со конус на врвот со пружина.
2. Држење на пипетата: Не ја држете пипетата во рака додека чекате да се вклучи центрифугата, циклерот итн. Внатрешноста на пипетата ќе се загрее и ќе доведе до ширење на воздушното перниче, што ќе резултира со отстапувања од зададениот волумен при пипетирање.
3. Претходно навлажнување: Навлажнувањето на воздухот во врвот и пипетата го подготвува врвот за примерокот и го избегнува испарувањето при аспирирање на преносниот волумен.
4. Вертикална аспирација: Ова е многу важно при ракување со мали волумени за да се избегне капиларниот ефект што се јавува кога пипетата се држи под агол.
5. Длабочина на потопување: Потопете го врвот што е можно помалку за да спречите влегување на течноста во него поради капиларниот ефект. Општо правило: Колку е помал врвот и волуменот, толку е помала длабочината на потопување. Препорачуваме максимум 2 mm при пипетирање мали волумени.
6. Дозирање под агол од 45°: Оптималниот истек на течноста е загарантиран кога пипетата се држи под агол од 45°.
7. Контакт со ѕидот на садот или површината на течноста: Мали количини можат правилно да се дозираат само кога врвот е притиснат кон ѕидот на садот или е потопен во течност. Дури и последната капка од врвот може да се дозира прецизно.
8. Издувување: Издувувањето е задолжително по издавање мали количини за да се издупчи дури и последната капка течност присутна во врвот. Издувувањето треба да се изврши и кон ѕидот на садот. Внимавајте да не внесете воздушни меурчиња во примерокот кога вршите издувување на површината на течноста.