Introductio
Quid est Extractio Acidi Nucleici?
Simplicissime dictum, extractio acidi nucleici est remotio RNA et/vel DNA ex exemplo et omnis superflui quod non est necessarium. Processus extractionis acida nucleica ex exemplo segregat et ea in forma eluati concentrati producit, libera a diluentibus et contaminantibus quae applicationes subsequentes afficere possent.
Applicationes Extractionis Acidi Nucleici
Acida nucleica purificata in amplissimis applicationibus variis adhibentur, per multas industrias diversas pertinentes. Medicina fortasse est campus ubi maxime adhibetur, cum RNA et DNA purificata ad multitudinem diversorum experimentorum propositorum requirantur.
Usus extractionis acidi nucleici in curatione sanitatis includunt:
- Sequentiatio Novae Generationis (NGS)
- Genotypus SNP secundum amplificationem
- Genotypatio secundum series (vel series)
Digestio Enzymorum Restrictorum
- Analyses per enzyma modificantia (e.g., ligationem et clonationem)
Sunt etiam aliae disciplinae ultra curationem sanitatis ubi extractio acidi nucleici adhibetur, inter quas (sed non solum) probationes paternitatis, medicina forensis et genomica.
Brevis Historia Extractionis Acidi Nucleici
Extractio ADNLongo tempore retro est, prima isolatione nota a medico Helvetico nomine Friderico Miescher anno 1869 peracta. Miescher sperabat se principia vitae fundamentalia solvere posse per determinationem compositionis chemicae cellularum. Postquam cum lymphocytis defecit, praecipitatum crudum DNA ex leucocytis in pus in fasciis abiectis inventis obtinere potuit. Hoc fecit addendo acidum et deinde alcali cellulae ut cytoplasma cellulae relinqueret, et deinde protocollum ad separandum DNA a ceteris proteinis excogitavit.
Post investigationes Miescheri, multi alii scientifici artes ad DNA separandum et purificandum promoverunt et evolverunt. Edwin Joseph Cohn, scientificis proteinorum, multas artes ad purificationem proteinorum tempore Belli Orbis Terrarum II excogitavit. Is fractionem albuminis serici plasmatis sanguinis separavit, quae magni momenti est ad pressionem osmoticam in vasis sanguineis conservandam. Hoc ad milites vivos conservandos maximi momenti erat.
Anno MCMLIII Franciscus Crick, una cum Rosalinda Franklin et Iacobo Watson, structuram ADN determinavit, demonstrans eam ex duobus filis longarum catenarum nucleotidorum acidi nucleici constare. Haec inventio nova viam stravit Meselson et Stahl, qui protocollum centrifugationis densitatis gradientis ad ADN ex bacteriis E. coli isolandum evolvere potuerunt, cum replicationem semi-conservativam ADN in experimento suo anni MCMLVIII demonstrarent.
Technicae Extractionis Acidi Nucleici
Quae sunt quattuor stadia extractionis ADN?
Omnes modi extractionis ad eosdem gradus fundamentales reducuntur.
Interruptio CellularumHoc stadium, quod etiam lysis cellularis appellatur, disruptionem parietis cellularis et/vel membranae cellularis implicat, ut liquores intracellulares acida nucleica desiderata continentes liberentur.
Remotio Detritorum Inutilium. Hoc includit lipida membranae, proteinas et alia acida nucleica inutilia quae applicationes subsequentes impedire possunt.
Isolatio. Sunt variae rationes ad acida nucleica quae interest ex lysato purgato quod creasti isolanda, quae in duas categorias principales cadunt: in solutione fundata vel in statu solido (vide sectionem sequentem).
Concentratio. Postquam acida nucleica ab omnibus aliis contaminantibus et diluentibus separata sunt, in eluato valde concentrato exhibentur.
Duo Genera Extractionis
Duo genera extractionis acidorum nucleicorum sunt – methodi in solutione et methodi in statu solido. Methodus in solutione etiam extractionis chemicae appellatur, quia chemica ad cellulam dissolvendam et ad materiam nucleicam accedendam adhibet. Hoc fieri potest vel compositis organicis ut phenolo et chloroformio, vel compositis inorganicis minus noxiis et ideo magis commendatis ut Proteinase K vel gel silicae.
Exempla variarum methodorum extractionis chemicae ad cellulam dissolvendam includunt:
Ruptura osmotica membranae
- Digestio enzymatica parietis cellularis
- Solubilizatio membranae
- Cum detergentibus
- Cum curatione alcali
Methodi status solidi, quae etiam mechanicae appellantur, explorationem interactionis ADN cum substrato solido comprehendunt. Selecta sphaera vel molecula cui ADN adhaerebit sed analytus non adhaerebit, fieri potest ut duae separationes fiant. Exempla technicarum extractionis phasis solidae includunt usum silicae et sphaerarum magneticarum.
Extractio Granorum Magneticorum Explicata
Methodus Extractionis Granorum Magneticorum
Potentia extractionis per globulos magneticos primum agnita est in patente Americana a Trevor Hawkins pro instituto investigationis Whitehead Institute deposita. Haec patente agnovit fieri posse ut materia genetica extrahatur eam ad solidum vehiculum, qui globulus magneticus esse posset, alligando. Principium est ut globulus magneticus valde functionatus adhibeatur cui materia genetica adligabitur, qui deinde a supernatante separari potest vi magnetica ad exteriorem partem vasis continentis specimen applicata.
Cur Extractionem Granulorum Magneticorum Utaris?
Technologia extractionis globulorum magneticorum magis magisque praevalet, propter potentiam quam praebet ad processus extractionis celeres et efficaces. Recenter, globuli magnetici valde functionales cum systematibus tamponibus idoneis evoluti sunt, quae automationem extractionis acidi nucleici et processum operis qui opibus parvus et sumptibus parcus est possibilem reddiderunt. Praeterea, methodi extractionis globulorum magneticorum gradus centrifugationis non includunt qui vires scissorias causare possunt quae longiores partes DNA frangunt. Hoc significat longiores fila DNA integra manere, quod in probationibus genomicis magni momenti est.
Tempus publicationis: XXV Novembris MMXXII