نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ ۽ مقناطيسي موتي جو طريقو

تعارف

نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ ڇا آهي؟

بلڪل سادي لفظن ۾، نيوڪلڪ ايسڊ ڪڍڻ هڪ نموني مان آر اين اي ۽/يا ڊي اين اي کي ختم ڪرڻ آهي ۽ اهو سڀ اضافي جيڪو ضروري ناهي. ڪڍڻ جو عمل نموني مان نيوڪلڪ ايسڊ کي الڳ ڪري ٿو ۽ انهن کي هڪ مرڪوز ايليويٽ جي صورت ۾ پيدا ڪري ٿو، جيڪو ڊائيلوئنٽ ۽ آلودگي کان پاڪ آهي جيڪو ڪنهن به ڊائون اسٽريم ايپليڪيشن کي متاثر ڪري سگهي ٿو.

نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ جا استعمال

صاف ٿيل نيوڪلڪ ايسڊ مختلف ايپليڪيشنن جي ڪثرت ۾ استعمال ڪيا ويندا آهن، ڪيترن ئي مختلف صنعتن ۾. صحت جي سار سنڀال شايد اهو علائقو آهي جتي اهو سڀ کان وڌيڪ استعمال ڪيو ويندو آهي، صاف ٿيل آر اين اي ۽ ڊي اين اي کي مختلف ۽ مختلف جانچ جي مقصدن لاءِ گهربل هوندو آهي.

صحت جي سار سنڀال ۾ نيوڪلڪ ايسڊ ڪڍڻ جا استعمال شامل آهن:

- پي سي آر ۽ ڪيو پي سي آر واڌارو

- ايندڙ نسل جي ترتيب (اين جي ايس)

- ايمپليفڪيشن تي ٻڌل ايس اين پي جينوٽائپنگ

- صف تي ٻڌل جينوٽائپنگ

- پابندي اينزائم هضم

- تبديل ٿيندڙ اينزائمز استعمال ڪندي تجزيو (مثال طور ليگيشن ۽ ڪلوننگ)

صحت جي سار سنڀال کان ٻاهر ٻيا به شعبا آهن جتي نيوڪلڪ ايسڊ ڪڍڻ استعمال ڪيو ويندو آهي، جنهن ۾ پيٽرنٽي ٽيسٽنگ، فارنزڪس ۽ جينومڪس شامل آهن پر ان تائين محدود نه آهن.

نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ جي مختصر تاريخ

ڊي اين اي ڪڍڻاهو هڪ ڊگهو سفر آهي، پهرين ڄاتل سڃاتل آئسوليشن 1869 ۾ هڪ سوئس طبيب فريڊرڪ ميشر پاران ڪئي وئي هئي. ميشر سيلز جي ڪيميائي ساخت کي طئي ڪندي زندگي جي بنيادي اصولن کي حل ڪرڻ جي اميد رکي رهيو هو. لففوسائٽس سان ناڪام ٿيڻ کان پوءِ، هو رد ٿيل پٽين تي پيپ ۾ مليل ليوڪو سائٽس مان ڊي اين اي جو خام پرسيپيٽ حاصل ڪرڻ جي قابل ٿي ويو. هن اهو سيل جي سائيٽوپلازم کي ڇڏڻ لاءِ سيل ۾ تيزاب ۽ پوءِ الڪلي شامل ڪندي ڪيو، ۽ پوءِ ڊي اين اي کي ٻين پروٽينن کان الڳ ڪرڻ لاءِ هڪ پروٽوڪول تيار ڪيو.

ميشر جي شاندار تحقيق کان پوءِ، ڪيترائي ٻيا سائنسدان ڊي اين اي کي الڳ ڪرڻ ۽ صاف ڪرڻ لاءِ طريقا تيار ڪرڻ ۽ ترقي ڪرڻ لاءِ اڳتي وڌيا آهن. ايڊون جوزف ڪوهن، هڪ پروٽين سائنسدان، ٻي عالمي جنگ دوران پروٽين جي صفائي لاءِ ڪيتريون ئي طريقا تيار ڪيا. هو رت جي پلازما جي سيرم البومين حصي کي الڳ ڪرڻ جو ذميوار هو، جيڪو رت جي رڳن ۾ آسموٽڪ دٻاءُ کي برقرار رکڻ ۾ اهم آهي. اهو سپاهين کي زنده رکڻ لاءِ اهم هو.

1953 ۾، فرانسس ڪرڪ، روزالنڊ فرينڪلن ۽ جيمس واٽسن سان گڏ، ڊي اين اي جي بناوت جو تعين ڪيو، اهو ڏيکاريو ته اهو نيوڪليڪ ايسڊ نيوڪليوٽائڊس جي ٻن ڊگهن زنجيرن مان ٺهيل هو. هن ڪاميابي دريافت ميسلسن ۽ اسٽال لاءِ رستو هموار ڪيو، جيڪي اي. ڪولي بيڪٽيريا کان ڊي اين اي کي الڳ ڪرڻ لاءِ هڪ کثافت گريڊينٽ سينٽرفيوگيشن پروٽوڪول تيار ڪرڻ جي قابل هئا جيئن انهن پنهنجي 1958 جي تجربي دوران ڊي اين اي جي نيم قدامت پسند نقل جو مظاهرو ڪيو.

نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ جون ٽيڪنڪون

ڊي اين اي ڪڍڻ جا 4 مرحلا ڪهڙا آهن؟
سڀ ڪڍڻ جا طريقا ساڳين بنيادي مرحلن تي مشتمل آهن.

سيل ۾ خللهي مرحلو، جنهن کي سيل ليسس پڻ چيو ويندو آهي، ان ۾ سيل وال ۽/يا سيل جھلي کي ٽوڙڻ شامل آهي، ته جيئن دلچسپي جي نيوڪليڪ ايسڊ تي مشتمل اندروني سيلولر سيال کي آزاد ڪيو وڃي.

ناپسنديده ملبے کي هٽائڻ. ان ۾ جھلي لپڊس، پروٽين ۽ ٻيا ناپسنديده نيوڪلڪ ايسڊ شامل آهن جيڪي هيٺئين وهڪري جي استعمال ۾ مداخلت ڪري سگهن ٿا.

الڳ ڪرڻ. توهان جي ٺاهيل صاف ٿيل لائسيٽ مان دلچسپي جي نيوڪلڪ ايسڊ کي الڳ ڪرڻ جا ڪيترائي مختلف طريقا آهن، جيڪي ٻن مکيه درجن جي وچ ۾ اچن ٿا: محلول تي ٻڌل يا مضبوط حالت (اڳيون حصو ڏسو).

ڪنسنٽريشن. نيوڪلڪ ايسڊ کي ٻين سڀني آلودگين ۽ ڊائيلوئنٽ کان الڳ ڪرڻ کان پوءِ، انهن کي هڪ انتهائي مرڪوز ايليويٽ ۾ پيش ڪيو ويندو آهي.

ڪڍڻ جا ٻه قسم
نيوڪلڪ ايسڊ ڪڍڻ جا ٻه قسم آهن - محلول تي ٻڌل طريقا ۽ مضبوط حالت جا طريقا. محلول تي ٻڌل طريقو ڪيميائي ڪڍڻ جي طريقي جي نالي سان پڻ سڃاتو وڃي ٿو، ڇاڪاڻ ته ان ۾ سيل کي ٽوڙڻ ۽ نيوڪلڪ مواد تائين رسائي حاصل ڪرڻ لاءِ ڪيميڪل استعمال ڪرڻ شامل آهي. اهو يا ته نامياتي مرکبات جهڙوڪ فينول ۽ ڪلوروفارم، يا گهٽ نقصانڪار ۽ تنهن ڪري وڌيڪ سفارش ڪيل غير نامياتي مرکبات جهڙوڪ پروٽينيز ڪي يا سليڪا جيل استعمال ڪري سگهجي ٿو.

سيل کي ٽوڙڻ لاءِ مختلف ڪيميائي ڪڍڻ جي طريقن جون مثالون شامل آهن:

- جھلي جو آسموٽڪ ڦاٽڻ

- سيل وال جو اينزيميٽڪ هضم

- جھلي جو حل ڪرڻ

- ڊٽرجنٽ سان

- الڪلي علاج سان

سالڊ اسٽيٽ ٽيڪنڪ، جن کي ميڪينڪل طريقا پڻ چيو ويندو آهي، ان ۾ اهو استعمال ڪرڻ شامل آهي ته ڊي اين اي ڪيئن هڪ مضبوط سبسٽريٽ سان لهه وچڙ ڪري ٿو. هڪ مالا يا ماليڪيول چونڊڻ سان جنهن سان ڊي اين اي ڳنڍيل هوندو پر تجزيه نگار نه هوندو، ٻنهي کي الڳ ڪرڻ ممڪن آهي. سالڊ فيز ڪڍڻ جي طريقن جون مثالون جن ۾ سليڪا ۽ مقناطيسي موتي استعمال ڪرڻ شامل آهن.

مقناطيسي موتي ڪڍڻ جي وضاحت ڪئي وئي

مقناطيسي موتي ڪڍڻ جو طريقو
مقناطيسي موتي استعمال ڪندي ڪڍڻ جي صلاحيت کي پهريون ڀيرو ٽريور هاڪنز پاران وائيٽ هيڊ انسٽيٽيوٽ ريسرچ اداري لاءِ داخل ڪيل آمريڪي پيٽنٽ ۾ تسليم ڪيو ويو. هن پيٽنٽ تسليم ڪيو ته جينياتي مواد کي هڪ مضبوط سپورٽ ڪيريئر سان ڳنڍڻ سان ڪڍڻ ممڪن هو، جيڪو هڪ مقناطيسي موتي ٿي سگهي ٿو. اصول اهو آهي ته توهان هڪ انتهائي فعال مقناطيسي موتي استعمال ڪندا آهيو جنهن تي جينياتي مواد جڙيل هوندو، جنهن کي پوءِ نموني کي رکڻ واري برتن جي ٻاهران مقناطيسي قوت لاڳو ڪندي سپرنيٽينٽ کان الڳ ڪري سگهجي ٿو.

مقناطيسي موتي ڪڍڻ ڇو استعمال ڪجي؟
مقناطيسي موتي ڪڍڻ واري ٽيڪنالاجي تيزي سان عام ٿي رهي آهي، ڇاڪاڻ ته ان ۾ تيز ۽ ڪارآمد ڪڍڻ جي طريقيڪار جي صلاحيت موجود آهي. تازن وقتن ۾ مناسب بفر سسٽم سان انتهائي فعال مقناطيسي موتي جي ترقي ٿي آهي، جنهن نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ جي خودڪار ۽ هڪ ڪم جي وهڪري کي ممڪن بڻايو آهي جيڪو تمام گهڻو وسيلو هلڪو ۽ قيمت-موثر آهي. ان کان علاوه، مقناطيسي موتي ڪڍڻ جي طريقن ۾ سينٽرفيوگيشن مرحلا شامل نه آهن جيڪي شيئر فورس جو سبب بڻجي سگهن ٿا جيڪي ڊي اين اي جي ڊگھي ٽڪرن کي ٽوڙي ڇڏيندا آهن. ان جو مطلب آهي ته ڊي اين اي جا ڊگھا تار برقرار رهن ٿا، جيڪو جينومڪس ٽيسٽنگ ۾ اهم آهي.