Pêşkêş
Derxistina Asîda Nukleîk çi ye?
Bi gotineke pir hêsan, derxistina asîda nukleîk, rakirina RNA û/an DNAyê ji nimûneyekê û hemû zêdehiya nehewce ye. Pêvajoya derxistinê asîdên nukleîk ji nimûneyekê vediqetîne û wan di forma eluateke konsantre de dide, bêyî madeyên dilopker û gemarî yên ku dikarin bandorê li ser her serîlêdanên paşîn bikin.
Serlêdanên Derxistina Asîda Nukleîk
Asîdên nukleîk ên safîkirî di gelek sepanên cûda de têne bikar anîn, di gelek pîşesaziyên cûda de. Lênihêrîna tenduristiyê dibe ku qada ku ew herî zêde tê bikar anîn be, ji ber ku RNA û DNAya safîkirî ji bo gelek armancên ceribandinê yên cûda hewce ye.
Serlêdanên derxistina asîda nukleîk di lênihêrîna tenduristiyê de ev in:
- Rêzkirina Nifşê Nû (NGS)
- Genotîpkirina SNP-ya li ser bingeha amplîfîkasyonê
- Genotîpkirina li ser bingeha rêzê
- Heriskirina bi Enzîma Sînorkirinê
- Analîz bi karanîna Enzîmên Guherandinê (mînak Lîgasyon û Klonkirin)
Ji bilî lênihêrîna tenduristiyê, warên din jî hene ku derxistina asîda nukleîk lê tê bikar anîn, di nav de ceribandina bavîtiyê, lêkolînên dadwerî û genomîk.
Dîrokeke Kurte ya Derxistina Asîda Nukleîk
Derxistina DNAyêEv rêbaz ji mêj ve vedigere, û yekem îzolekirina naskirî ji hêla bijîşkek Swîsrî yê bi navê Friedrich Miescher di sala 1869an de hatiye kirin. Miescher hêvî dikir ku prensîbên bingehîn ên jiyanê bi destnîşankirina pêkhateya kîmyewî ya şaneyan çareser bike. Piştî ku bi lîmfosîtan re têk çû, ew karîbû ji lekosîtên ku di nav pizê de li ser pêçanên avêtin de hatine dîtin, bermahiyek xav a DNA bi dest bixe. Wî ev yek bi zêdekirina asîd û dûv re alkalî li şaneyê kir da ku ji sîtoplazmaya şaneyê derkeve, û dûv re protokolek pêşxist da ku DNA ji proteînên din veqetîne.
Piştî lêkolîna şoreşger a Miescher, gelek zanyarên din teknîkên ji bo veqetandin û paqijkirina DNAyê pêş xistin û pêşve xistin. Edwin Joseph Cohn, zanyarekî proteînê, di dema Şerê Cîhanê yê Duyemîn de gelek teknîk ji bo paqijkirina proteînê pêş xist. Ew berpirsiyarê veqetandina fraksiyona albûmîna serumê ya plazmaya xwînê bû, ku di parastina zexta osmotîk a di damarên xwînê de girîng e. Ev ji bo zindîmana leşkeran pir girîng bû.
Di sala 1953an de, Francis Crick, ligel Rosalind Franklin û James Watson, avahiya DNAyê destnîşan kirin û nîşan dan ku ew ji du têlên zincîrên dirêj ên nukleotîdên asîda nukleîk pêk tê. Vê keşfa nû rê li ber Meselson û Stahl vekir, yên ku karîn protokola santrifujkirina gradyana densiteyê pêş bixin da ku DNAyê ji bakteriya E. Coli veqetînin, ji ber ku wan di ceribandina xwe ya 1958an de dubarekirina nîv-parastî ya DNAyê nîşan da.
Teknîkên Derxistina Asîda Nukleîk
4 qonaxên derxistina DNAyê çi ne?
Hemî rêbazên dezenfektekirinê li ser heman gavên bingehîn têne girtin.
Têkçûna HucreyêEv qonax, ku wekî lîza şaneyê jî tê zanîn, hilweşandina dîwarê şaneyê û/an parzûna şaneyê vedihewîne, da ku şilavên nav-şaneyê yên ku asîdên nukleîk ên balkêş dihewînin werin berdan.
Rakirina Bermayiyên Nexwestî. Ev lîpîdên parzûnê, proteîn û asîdên nukleîk ên nexwestî yên din dihewîne ku dikarin bi serîlêdanên paşîn re mudaxele bikin.
Tecrîdkirin. Ji bo tecrîdkirina asîdên nukleîk ên balkêş ji lîzata paqijkirî ya ku we çêkiriye, gelek awayên cûda hene, ku di navbera du kategoriyên sereke de ne: çareseriya bingehîn an rewşa hişk (li beşa din binêre).
Konsantrasyon. Piştî ku asîdên nukleîk ji hemî gemarî û diluentên din hatin veqetandin, ew di eluatek pir konsantre de têne pêşkêş kirin.
Du Cureyên Derxistinê
Du cureyên derxistina asîda nukleîk hene - rêbazên li ser bingeha çareseriyê û rêbazên rewşa hişk. Rêbaza li ser bingeha çareseriyê wekî rêbaza derxistina kîmyewî jî tê zanîn, ji ber ku ew karanîna kîmyewîyan ji bo hilweşandina şaneyê û gihîştina materyalê nukleîk vedihewîne. Ev dikare bi karanîna pêkhateyên organîk ên wekî fenol û kloroform, an jî pêkhateyên neorganîk ên kêmtir zirardar û ji ber vê yekê bêtir pêşniyarkirî yên wekî Proteînaza K an jela silîka be.
Nimûneyên rêbazên cûda yên derxistina kîmyewî ji bo hilweşandina şaneyekê ev in:
- Şikestina osmotîk a perdeyê
- Heriskirina enzîmatîk a dîwarê şaneyê
- Çareserkirina membranê
- Bi deterjanan
- Bi dermankirina alkaliyê
Teknîkên rewşa hişk, ku wekî rêbazên mekanîkî jî têne zanîn, karanîna awayê têkiliya DNA bi substratek hişk vedihewîne. Bi hilbijartina mûrek an molekulek ku DNA dê pê ve girêbide lê analît pê ve girêbide, mimkun e ku herdu werin veqetandin. Mînakên teknîkên derxistina qonaxa hişk di nav de karanîna mûrekên silîka û magnetîkî hene.
Derxistina Morîkên Magnetîkî Hat Şirovekirin
Rêbaza Derxistina Morîkên Magnetîkî
Potansiyela derxistinê bi karanîna morîkên magnetîkî cara yekem di patenteke Amerîkî de ku ji hêla Trevor Hawkins ve ji bo saziya lêkolînê ya Enstîtuya Whitehead hatî pêşkêş kirin, hate nas kirin. Ev patent qebûl kir ku gengaz e ku materyalên genetîkî bi girêdana wan bi hilgirek piştgirî ya zexm ve werin derxistin, ku dikare morîkek magnetîkî be. Prensîb ew e ku hûn morîkek magnetîkî ya pir fonksiyonel bikar tînin ku materyalê genetîkî dê pê ve were girêdan, ku dûv re dikare bi sepandina hêzek magnetîkî li derveyî konteynera ku nimûne digire ji supernatantê were veqetandin.
Çima Derxistina Morîkên Magnetîkî Bikar Bînin?
Teknolojiya derxistina mûyên magnetîkî, ji ber potansiyela ku ew ji bo prosedurên derxistinê yên bilez û bibandor heye, her ku diçe belavtir dibe. Di demên dawî de, pêşkeftinên mûyên magnetîkî yên pir fonksiyonel bi pergalên tamponê yên guncaw çêbûne, ku otomatîkkirina derxistina asîda nukleîk û herikîna kar a ku çavkaniya wê pir sivik û lêçûn-bandor e gengaz kiriye. Her weha, rêbazên derxistina mûyên magnetîkî gavên santrifujkirinê nagirin nav xwe ku dikarin bibin sedema hêzên birînê ku perçeyên dirêjtir ên DNA-yê dişkînin. Ev tê vê wateyê ku têlên dirêjtir ên DNA-yê saxlem dimînin, ku di ceribandina genomîkê de girîng e.
Dema weşandinê: 25ê Mijdarê-2022