Khi hút thể tích từ 0,2 đến 5 µL, độ chính xác và độ chuẩn xác khi hút là vô cùng quan trọng, kỹ thuật hút tốt là điều cần thiết vì lỗi xử lý dễ thấy hơn khi hút thể tích nhỏ.
Khi tập trung nhiều hơn vào việc giảm thuốc thử và chi phí, nhu cầu về thể tích nhỏ hơn đang tăng cao, ví dụ, để chuẩn bị PCR Mastermix hoặc phản ứng enzyme. Nhưng việc hút thể tích nhỏ từ 0,2 – 5 µL đặt ra những thách thức mới về độ chính xác và độ chính xác của việc hút. Những điểm sau đây là cần thiết:
- Kích thước pipet và đầu tip: Luôn chọn pipet có thể tích danh nghĩa thấp nhất có thể và đầu tip nhỏ nhất để giữ cho đệm khí nhỏ nhất có thể. Khi hút 1 µL, ví dụ, hãy chọn pipet 0,25 – 2,5 µL và đầu tip phù hợp thay vì pipet 1 – 10 µL.
- Hiệu chuẩn và bảo trì: Điều quan trọng là pipet của bạn phải được hiệu chuẩn và bảo trì đúng cách. Các điều chỉnh nhỏ và các bộ phận bị hỏng trên pipet sẽ dẫn đến sự gia tăng lớn về các giá trị lỗi hệ thống và ngẫu nhiên. Hiệu chuẩn theo ISO 8655 phải được thực hiện một lần một năm.
- Pipet dịch chuyển tích cực: Kiểm tra xem bạn có pipet dịch chuyển tích cực với phạm vi thể tích thấp trong phòng thí nghiệm của mình không. Nhìn chung, sử dụng loại pipet này sẽ cho kết quả hút tốt hơn về độ chính xác và độ chính xác so với pipet đệm khí cổ điển.
- Cố gắng sử dụng thể tích lớn hơn: Bạn có thể cân nhắc pha loãng mẫu của mình để hút các thể tích lớn hơn với cùng một lượng trong phản ứng cuối cùng. Điều này có thể giảm lỗi hút với các thể tích mẫu rất nhỏ.
Ngoài một công cụ tốt, nhà nghiên cứu phải có kỹ thuật hút mẫu rất tốt. Đặc biệt chú ý đến các bước sau:
- Gắn đầu tip: Không kẹp pipet vào đầu tip vì điều này có thể làm hỏng đầu tip nhỏ khiến chùm chất lỏng bị chuyển hướng hoặc làm hỏng lỗ. Chỉ dùng lực nhẹ khi gắn đầu tip và sử dụng pipet có đầu tip hình nón lò xo.
- Giữ pipet: Không giữ pipet bằng tay trong khi chờ máy ly tâm, máy chạy tuần hoàn, v.v. Bên trong pipet sẽ nóng lên và khiến đệm khí giãn nở, dẫn đến sai lệch so với thể tích đã cài đặt khi hút.
- Làm ướt trước: Làm ẩm không khí bên trong đầu tip và pipet để chuẩn bị đầu tip cho mẫu và tránh bay hơi khi hút thể tích chuyển.
- Hút theo chiều dọc: Điều này rất quan trọng khi xử lý thể tích nhỏ để tránh hiệu ứng mao dẫn xảy ra khi cầm pipet ở một góc nghiêng.
- Độ sâu nhúng: Nhúng đầu tip càng ít càng tốt để tránh chất lỏng đi vào đầu tip do hiệu ứng mao dẫn. Nguyên tắc chung: Đầu tip và thể tích càng nhỏ thì độ sâu nhúng càng thấp. Chúng tôi khuyến nghị tối đa là 2 mm khi hút thể tích nhỏ.
- Phân phối ở góc 45°: Đảm bảo dòng chảy tối ưu của chất lỏng khi giữ pipet ở góc 45°.
- Tiếp xúc với thành mạch hoặc bề mặt chất lỏng: Chỉ có thể phân phối đúng lượng nhỏ khi đầu kim được giữ sát vào thành mạch hoặc nhúng vào chất lỏng. Ngay cả giọt cuối cùng từ đầu kim cũng có thể được phân phối chính xác.
- Thổi ra: Thổi ra là bắt buộc sau khi phân phối lượng nhỏ để phân phối ngay cả giọt chất lỏng cuối cùng có trong đầu. Thổi ra cũng nên được thực hiện trên thành bình. Cẩn thận không để bọt khí vào mẫu khi thực hiện thổi ra trên bề mặt chất lỏng.
Thời gian đăng: 18-02-2021