Pri pipetovaní objemov od 0,2 do 5 µl je presnosť a precíznosť pipetovania mimoriadne dôležitá. Správna pipetovacia technika je nevyhnutná, pretože chyby pri manipulácii sú pri malých objemoch zreteľnejšie.
Keďže sa kladie väčší dôraz na znižovanie množstva činidiel a nákladov, sú menšie objemy veľmi žiadané, napr. na prípravu PCR Mastermixu alebo enzýmových reakcií. Pipetovanie malých objemov od 0,2 do 5 µl však predstavuje nové výzvy pre presnosť a precíznosť pipetovania. Nasledujúce body sú nevyhnutné:
- Veľkosť pipety a špičky: Vždy si vyberte pipetu s čo najnižším nominálnym objemom a najmenšou špičkou, aby sa vzduchový vankúš udržal čo najmenší. Pri pipetovaní napr. 1 µl zvoľte pipetu s objemom 0,25 – 2,5 µl a zodpovedajúcu špičku, a nie pipetu s objemom 1 – 10 µl.
- Kalibrácia a údržba: Je nevyhnutné, aby boli vaše pipety správne kalibrované a udržiavané. Malé úpravy a poškodené časti na pipete vedú k masívnemu nárastu systematických a náhodných chýb. Kalibrácia podľa normy ISO 8655 sa musí vykonať raz ročne.
- Objemové pipety: Skontrolujte, či máte vo svojom laboratóriu objemovú pipetu s nízkym objemovým rozsahom. Vo všeobecnosti použitie tohto typu pipety vedie k lepším výsledkom pipetovania z hľadiska presnosti a precíznosti ako pri klasických pipetách so vzduchovým vankúšom.
- Skúste použiť väčšie objemy: Môžete zvážiť zriedenie vzorky, aby ste pipetovali väčšie objemy s rovnakým množstvom v konečnej reakcii. To môže znížiť chyby pri pipetovaní s veľmi malými objemami vzoriek.
Okrem dobrého nástroja musí mať výskumník veľmi dobrú pipetovaciu techniku. Venujte zvláštnu pozornosť nasledujúcim krokom:
- Pripevnenie hrotu: Pipetu nenasadzujte na hrot, pretože by to mohlo poškodiť tenký koniec hrotu, čo by mohlo spôsobiť presmerovanie lúča kvapaliny alebo poškodenie otvoru. Pri pripevňovaní hrotu vyvíjajte len mierny tlak a používajte pipetu s pružinovým kužeľom hrotu.
- Držanie pipety: Nedržte pipetu v ruke, kým čakáte na centrifúgu, cyklér atď. Vnútro pipety sa zahreje a vzduchový vankúš sa roztiahne, čo bude mať za následok odchýlky od nastaveného objemu pri pipetovaní.
- Predvlhčenie: Zvlhčenie vzduchu vo vnútri hrotu a pipety pripraví hrot na vzorku a zabráni odparovaniu pri nasávaní preneseného objemu.
- Vertikálna aspirácia: Toto je veľmi dôležité pri manipulácii s malými objemami, aby sa predišlo kapilárnemu efektu, ku ktorému dochádza pri držaní pipety pod uhlom.
- Hĺbka ponoru: Ponárajte hrot čo najmenej, aby ste zabránili vniknutiu kvapaliny do hrotu v dôsledku kapilárneho efektu. Základné pravidlo: Čím menší je hrot a objem, tým nižšia je hĺbka ponoru. Pri pipetovaní malých objemov odporúčame maximálne 2 mm.
- Dávkovanie pod uhlom 45°: Optimálny odtok kvapaliny je zaručený, keď je pipeta držaná pod uhlom 45°.
- Kontakt so stenou nádoby alebo povrchom kvapaliny: Malé objemy je možné správne dávkovať iba vtedy, keď je hrot pritlačený k stene nádoby alebo ponorený do kvapaliny. Dokonca aj posledná kvapka z hrotu sa dá presne dávkovať.
- Prefúknutie: Po nadávkovaní malých objemov je prefúknutie povinné, aby sa odstránila aj posledná kvapka kvapaliny prítomná v hrote. Prefúknutie by sa malo vykonávať aj pri stene nádoby. Pri prefúkaní pri hladine kvapaliny dávajte pozor, aby ste do vzorky nevniesli vzduchové bubliny.
Čas uverejnenia: 18. februára 2021