Sådan pipetteres små mængder med håndholdte manuelle pipetter

Efterhånden som der lægges mere fokus på at reducere reagenser og omkostninger, er der stor efterspørgsel efter mindre volumener, f.eks. til fremstilling af PCR Mastermix eller enzymreaktioner. Men pipettering af små volumener fra 0,2 – 5 µL stiller nye udfordringer for pipetteringsnøjagtighed og præcision. Følgende punkter er vigtige:

1. Pipette- og spidsstørrelse: Vælg altid pipetten med det lavest mulige nominelle volumen og den mindste spids for at holde luftpuden så lille som muligt. Ved pipettering af f.eks. 1 µL skal du vælge en 0,25-2,5 µL pipette og matchende spids i stedet for en 1-10 µL pipette.
2. Kalibrering og vedligeholdelse: Det er vigtigt, at dine pipetter er korrekt kalibreret og vedligeholdt. Små justeringer og ødelagte dele på en pipette fører til en massiv stigning i systematiske og tilfældige fejlværdier. En kalibrering i henhold til ISO 8655 skal udføres én gang om året.
3. Positive fortrængningspipetter: Tjek om du har en positiv fortrængningspipette med et lavt volumenområde i dit laboratorium. Generelt fører brugen af ​​denne type pipette til et bedre pipetteringsresultat med hensyn til nøjagtighed og præcision end med klassiske luftpudepipetter.
4. Prøv at bruge større volumener: Du kan overveje at fortynde din prøve for at pipettere større volumener med samme mængde i den endelige reaktion. Dette kan reducere pipetteringsfejl med meget små prøvevolumener.

Udover et godt værktøj skal forskeren have en meget god pipetteringsteknik. Vær særlig opmærksom på følgende trin:

1. Spidsfastgørelse: Undgå at klemme pipetten fast på spidsen, da dette kan beskadige den fine spidsende, hvilket kan føre til, at væskestrålen bliver omdirigeret, eller at åbningen beskadiges. Tryk kun let, når du fastgør en spids, og brug en pipette med en fjederbelastet spidskonus.
2. Hold pipetten: Hold ikke pipetten i hånden, mens du venter på centrifugen, cykleren osv. Pipettens inderside vil blive varm, hvilket vil føre til, at luftpuden udvider sig, hvilket resulterer i afvigelser fra den indstillede mængde under pipettering.
3. Forbefugtning: Befugtningen af ​​luften inde i spidsen og pipetten forbereder spidsen til prøven og undgår fordampning ved aspiration af overførselsvolumenet.
4. Vertikal aspiration: Dette er meget vigtigt ved håndtering af små volumener for at undgå den kapillæreffekt, der opstår, når pipetten holdes i en vinkel.
5. Nedsænkningsdybde: Nedsænk spidsen så lidt som muligt for at forhindre væske i at trænge ind i spidsen på grund af kapillæreffekten. Tommelfingerregel: Jo mindre spids og volumen, desto lavere er nedsænkningsdybden. Vi anbefaler maksimalt 2 mm ved pipettering af små volumener.
6. Dispensering i en vinkel på 45°: Optimal udstrømning af væsken garanteres, når pipetten holdes i en vinkel på 45°.
7. Kontakt med karvæggen eller væskeoverfladen: Små mængder kan kun dispenseres korrekt, når spidsen holdes mod karvæggen eller nedsænkes i væske. Selv den sidste dråbe fra spidsen kan dispenseres præcist.
8. Udblæsning: Det er nødvendigt at udblæse prøven efter dosering af små mængder for at udblæse selv den sidste dråbe væske i spidsen. Udblæsningen skal også udføres mod beholderens væg. Vær forsigtig med ikke at bringe luftbobler ind i prøven, når du udfører en udblæsning på væskeoverfladen.