Hur man pipetterar små volymer med handhållna manuella pipetter

I takt med att mer fokus läggs på att minska reagenser och kostnader blir mindre volymer mycket efterfrågade, t.ex. för beredning av PCR-mastermix eller enzymreaktioner. Men pipettering av små volymer från 0,2–5 µL innebär nya utmaningar för pipetteringens noggrannhet och precision. Följande punkter är viktiga:

1. Pipett- och spetsstorlek: Välj alltid pipetten med lägsta möjliga nominella volym och minsta spets för att hålla luftkudden så liten som möjligt. Vid pipettering av t.ex. 1 µL, välj en 0,25–2,5 µL pipett och matchande spets snarare än en 1–10 µL pipett.
2. Kalibrering och underhåll: Det är viktigt att dina pipetter är korrekt kalibrerade och underhållna. Små justeringar och trasiga delar på en pipett leder till en kraftig ökning av systematiska och slumpmässiga felvärden. En kalibrering enligt ISO 8655 måste utföras en gång om året.
3. Positiv förträngningspipetter: Kontrollera om du har en positiv förträngningspipett med ett lågt volymområde i ditt laboratorium. Generellt sett leder användningen av denna typ av pipett till ett bättre pipetteringsresultat vad gäller noggrannhet och precision än med klassiska luftkuddepipetter.
4. Försök att använda större volymer: Du kan överväga att späda ut ditt prov för att pipettera större volymer med samma mängd i den slutliga reaktionen. Detta kan minska pipetteringsfel med mycket små provvolymer.

Förutom ett bra verktyg måste forskaren ha en mycket bra pipetteringsteknik. Var särskilt uppmärksam på följande steg:

1. Spetsfastsättning: Se till att pipetten inte fastnar på spetsen eftersom det kan skada den fina spetsen, vilket kan leda till att vätskestrålen omdirigeras eller skada öppningen. Tryck endast lätt när du fäster en spets och använd en pipett med fjäderbelastad spetskon.
2. Att hålla pipetten: Håll inte pipetten i handen medan du väntar på centrifugen, cyklern etc. Pipettens insida kommer att värmas upp och luftkudden kommer att expandera, vilket resulterar i avvikelser från den inställda volymen vid pipettering.
3. Förvätning: Befuktningen av luften inuti spetsen och pipetten förbereder spetsen för provet och undviker avdunstning vid aspiration av överföringsvolymen.
4. Vertikal aspiration: Detta är mycket viktigt vid hantering av små volymer för att undvika kapilläreffekten som uppstår när pipetten hålls i vinkel.
5. Nedsänkningsdjup: Sänk ner spetsen så lite som möjligt för att förhindra att vätska kommer in i spetsen på grund av kapilläreffekten. Tumregel: Ju mindre spets och volym, desto lägre nedsänkningsdjup. Vi rekommenderar maximalt 2 mm vid pipettering av små volymer.
6. Dispensering i 45° vinkel: Optimalt utflöde av vätskan garanteras när pipetten hålls i 45° vinkel.
7. Kontakt med kärlväggen eller vätskeytan: Små volymer kan endast doseras korrekt när spetsen hålls mot kärlväggen eller doppas i vätska. Även den sista droppen från spetsen kan doseras exakt.
8. Utblåsning: En utblåsning är obligatorisk efter dispensering av låga volymer för att även kunna dispensera den sista droppen vätska som finns kvar i spetsen. Utblåsningen bör också utföras mot kärlväggen. Var försiktig så att inte luftbubblor kommer in i provet när du utför en utblåsning på vätskeytan.