Приликом пипетирања запремина од 0,2 до 5 µL, тачност и прецизност пипетирања су од највеће важности, а добра техника пипетирања је неопходна јер су грешке у руковању очигледније код малих запремина.
Како се све већи фокус ставља на смањење реагенса и трошкова, мање запремине су веома тражене, нпр. за припрему PCR мастермикса или ензимских реакција. Али пипетирање малих запремина од 0,2 – 5 µL поставља нове изазове за тачност и прецизност пипетирања. Следеће тачке су неопходне:
- Величина пипете и врха: Увек бирајте пипету са најмањом могућом номиналном запремином и најмањим врхом како би ваздушни јастук био што мањи. Приликом пипетирања 1 µL, нпр. изаберите пипету од 0,25 – 2,5 µL и одговарајући врх уместо пипете од 1 – 10 µL.
- Калибрација и одржавање: Неопходно је да ваше пипете буду правилно калибрисане и одржаване. Мала подешавања и поломљени делови на пипети доводе до огромног повећања вредности систематских и случајних грешака. Калибрација према ISO 8655 мора се обавити једном годишње.
- Пипете са позитивним померањем: Проверите да ли у вашој лабораторији имате пипету са позитивним померањем и малим опсегом запремине. Генерално, коришћење ове врсте пипете доводи до бољих резултата пипетирања у погледу тачности и прецизности него код класичних пипета са ваздушним јастуком.
- Покушајте да користите веће запремине: Можете размотрити разблаживање узорка како бисте пипетирали веће запремине са истом количином у финалној реакцији. Ово може смањити грешке пипетирања са веома малим запреминама узорка.
Поред доброг алата, истраживач мора имати веома добру технику пипетирања. Обратите посебну пажњу на следеће кораке:
- Причвршћивање врха: Немојте заглављивати пипету на врху јер то може оштетити фину вршну линију, проузроковати преусмеравање снопа течности или оштетити отвор. Приликом причвршћивања врха вршите само лаган притисак и користите пипету са конусним врхом са опругом.
- Држање пипете: Не држите пипету у руци док чекате центрифугу, циклер итд. Унутрашњост пипете ће се загрејати и довести до ширења ваздушног јастука, што ће резултирати одступањима од подешене запремине приликом пипетирања.
- Претходно влажење: Влаживање ваздуха унутар врха и пипете припрема врх за узорак и спречава испаравање приликом усисавања пренете запремине.
- Вертикална аспирација: Ово је веома важно при руковању малим запреминама како би се избегао капиларни ефекат који се јавља када се пипета држи под углом.
- Дубина урањања: Потопите врх што је мање могуће како бисте спречили улазак течности у врх због капиларног ефекта. Правило: Што је мањи врх и запремина, то је мања дубина урањања. Препоручујемо максимум 2 мм приликом пипетирања малих запремина.
- Дозирање под углом од 45°: Оптимално истискивање течности је загарантовано када се пипета држи под углом од 45°.
- Контакт са зидом суда или површином течности: Мале запремине могу се правилно дозирати само када се врх држи уз зид суда или урони у течност. Чак се и последња кап са врха може прецизно дозирати.
- Издувавање: Издувавање је обавезно након испуштања малих запремина како би се испустила и последња кап течности присутна у врху. Издувавање такође треба изводити уз зид посуде. Водите рачуна да не унесете мехуриће ваздуха у узорак када изводите издувавање на површини течности.
Време објаве: 18. фебруар 2021.