Bij het pipetteren van volumes van 0,2 tot 5 µL is de nauwkeurigheid en precisie van het pipetteren van het grootste belang. Een goede pipetteertechniek is essentieel, omdat fouten bij het hanteren sneller opvallen bij kleine volumes.
Naarmate er meer nadruk wordt gelegd op het verminderen van reagentia en kosten, is er een grote vraag naar kleinere volumes, bijvoorbeeld voor de bereiding van PCR Mastermix of enzymreacties. Het pipetteren van kleine volumes van 0,2 tot 5 µl brengt echter nieuwe uitdagingen met zich mee voor de nauwkeurigheid en precisie van pipetteren. De volgende punten zijn essentieel:
- Pipet- en tipgrootte: Kies altijd de pipet met het laagst mogelijke nominale volume en de kleinste tip om het luchtkussen zo klein mogelijk te houden. Kies bij het pipetteren van bijvoorbeeld 1 µl voor een pipet van 0,25 tot 2,5 µl en een bijpassende tip in plaats van een pipet van 1 tot 10 µl.
- Kalibratie en onderhoud: Het is essentieel dat uw pipetten correct gekalibreerd en onderhouden worden. Kleine aanpassingen en kapotte onderdelen van een pipet leiden tot een enorme toename van systematische en toevallige foutwaarden. Een kalibratie volgens ISO 8655 moet eenmaal per jaar worden uitgevoerd.
- Positieve verplaatsingspipetten: Controleer of u een positieve verplaatsingspipet met een laag volumebereik in uw lab heeft. Over het algemeen leidt het gebruik van dit type pipet tot betere pipetteerresultaten qua nauwkeurigheid en precisie dan met klassieke luchtkussenpipetten.
- Probeer grotere volumes te gebruiken: U kunt overwegen uw monster te verdunnen om grotere volumes te pipetteren met dezelfde hoeveelheid in de uiteindelijke reactie. Dit kan pipetteerfouten met zeer kleine monstervolumes verminderen.
Naast een goed instrument moet de onderzoeker ook over een zeer goede pipetteertechniek beschikken. Besteed daarbij speciale aandacht aan de volgende stappen:
- Bevestiging van de tip: Klem de pipet niet vast op de tip, aangezien dit het fijne uiteinde kan beschadigen, waardoor de vloeistofstraal kan worden omgeleid of de opening kan beschadigen. Oefen slechts lichte druk uit bij het bevestigen van een tip en gebruik een pipet met een veerbelaste tipconus.
- De pipet vasthouden: Houd de pipet niet vast terwijl u wacht op de centrifuge, cycler, enz. De binnenkant van de pipet warmt dan op en zorgt ervoor dat het luchtkussen uitzet, waardoor er afwijkingen van het ingestelde volume kunnen ontstaan bij het pipetteren.
- Voorbevochtigen: Door de lucht in de punt en de pipet te bevochtigen, wordt de punt voorbereid op het monster. Zo wordt verdamping bij het opzuigen van het overdrachtsvolume voorkomen.
- Verticale aspiratie: Dit is erg belangrijk bij het hanteren van kleine volumes om het capillaire effect te voorkomen dat optreedt wanneer de pipet onder een hoek wordt gehouden.
- Immersiediepte: Dompel de tip zo min mogelijk onder om te voorkomen dat er vloeistof in de tip komt door het capillaire effect. Vuistregel: Hoe kleiner de tip en het volume, hoe lager de immersiediepte. Bij het pipetteren van kleine volumes adviseren wij een maximum van 2 mm.
- Doseren onder een hoek van 45°: Wanneer u de pipet onder een hoek van 45° houdt, is een optimale uitstroom van de vloeistof gegarandeerd.
- Contact met de vaatwand of het vloeistofoppervlak: Kleine volumes kunnen alleen correct worden gedoseerd wanneer de punt tegen de vaatwand wordt gehouden of in vloeistof wordt ondergedompeld. Zelfs de laatste druppel van de punt kan nauwkeurig worden gedoseerd.
- Uitblazen: Uitblazen is verplicht na het doseren van kleine volumes om zelfs de laatste druppel vloeistof in de tip te doseren. Het uitblazen moet ook tegen de wand van het vat plaatsvinden. Let op dat er geen luchtbellen in het monster komen bij het uitblazen aan het vloeistofoppervlak.
Geplaatst op: 18-02-2021