Pipetējot tilpumus no 0,2 līdz 5 µl, pipetēšanas precizitāte un precizitāte ir ārkārtīgi svarīga, un laba pipetēšanas tehnika ir būtiska, jo kļūdas apstrādē ir acīmredzamākas ar nelieliem tilpumiem.
Tā kā arvien lielāka uzmanība tiek pievērsta reaģentu un izmaksu samazināšanai, mazāki tilpumi ir ļoti pieprasīti, piemēram, PCR Mastermix vai fermentu reakciju sagatavošanai. Taču mazu tilpumu (no 0,2 līdz 5 µL) pipetēšana rada jaunus izaicinājumus pipetēšanas precizitātei un precizitātei. Svarīgi ir šādi punkti:
- Pipetes un uzgaļa izmērs: Vienmēr izvēlieties pipeti ar pēc iespējas mazāku nominālo tilpumu un mazāko uzgali, lai gaisa spilvens būtu pēc iespējas mazāks. Pipetējot, piemēram, 1 µl, izvēlieties 0,25–2,5 µl pipeti un atbilstošu uzgali, nevis 1–10 µl pipeti.
- Kalibrēšana un apkope: Ir svarīgi, lai jūsu pipetes tiktu pareizi kalibrētas un uzturētas. Nelielas pipetes korekcijas un salauztas detaļas izraisa ievērojamu sistemātisku un nejaušu kļūdu vērtību pieaugumu. Kalibrēšana saskaņā ar ISO 8655 jāveic reizi gadā.
- Pozitīvās pārvietošanas pipetes: pārbaudiet, vai jūsu laboratorijā ir pozitīvas pārvietošanas pipete ar zemu tilpuma diapazonu. Kopumā šāda veida pipetes lietošana nodrošina labāku pipetēšanas rezultātu precizitātes un precizitātes ziņā nekā klasiskās gaisa spilvenu pipetes.
- Centieties izmantot lielākus tilpumus: Varat apsvērt parauga atšķaidīšanu, lai gala reakcijā ar tādu pašu daudzumu pipetētu lielākus tilpumus. Tas var samazināt pipetēšanas kļūdas ar ļoti maziem parauga tilpumiem.
Papildus labam instrumentam pētniekam ir jābūt ļoti labai pipetēšanas tehnikai. Pievērsiet īpašu uzmanību šādiem soļiem:
- Uzgaļa stiprinājums: Neiespiežiet pipeti uz gala, jo tas var sabojāt smalko galu, novirzīt šķidruma strūklu vai sabojāt atveri. Pievienojot uzgali, pielietojiet tikai vieglu spiedienu un izmantojiet pipeti ar atsperes konusa galu.
- Pipetes turēšana: Neturiet pipeti rokā, gaidot centrifūgu, cikleru utt. Pipetes iekšpuse uzkarsīs un izraisīs gaisa spilvena izplešanos, kā rezultātā pipetēšanas laikā var rasties novirzes no iestatītā tilpuma.
- Iepriekšēja samitrināšana: Gaisa mitrināšana uzgaļa un pipetes iekšpusē sagatavo uzgali paraugam un novērš iztvaikošanu, aspirējot pārneses tilpumu.
- Vertikālā aspirācija: Tas ir ļoti svarīgi, strādājot ar nelieliem tilpumiem, lai izvairītos no kapilārā efekta, kas rodas, ja pipete tiek turēta leņķī.
- Iegremdēšanas dziļums: Iegremdējiet galu pēc iespējas mazāk, lai kapilārā efekta dēļ novērstu šķidruma iekļūšanu uzgalī. Īkšķa likums: Jo mazāks uzgalis un tilpums, jo mazāks iegremdēšanas dziļums. Pipetējot mazus tilpumus, iesakām ne vairāk kā 2 mm.
- Dozēšana 45° leņķī: Optimāla šķidruma izplūde tiek garantēta, ja pipete tiek turēta 45° leņķī.
- Saskare ar trauka sienu vai šķidruma virsmu: Nelielus tilpumus var pareizi dozēt tikai tad, ja uzgalis tiek turēts pret trauka sienu vai iegremdēts šķidrumā. Pat pēdējo pilienu no uzgaļa var dozēt precīzi.
- Izpūšana: Pēc nelielu tilpumu izsmidzināšanas ir obligāti jāveic izpūšana, lai izpūstu pat pēdējo šķidruma pilienu, kas atrodas uzgalī. Izpūšana jāveic arī pret trauka sienu. Veicot izpūšanu pie šķidruma virsmas, jāuzmanās, lai paraugā neiekļūtu gaisa burbuļi.
Publicēšanas laiks: 2021. gada 18. februāris