כיצד לבצע פיפטה של ​​נפחים קטנים בעזרת פיפטות ידניות

ככל שמושם דגש רב יותר על הפחתת ריאגנטים ועלויות, נפחים קטנים יותר מבוקשים מאוד, למשל, להכנת PCR Mastermix או תגובות אנזימים. אך פיפטה של ​​נפחים קטנים מ-0.2 עד 5 מיקרוליטר מציבה אתגרים חדשים לדיוק ודיוק פיפטה. הנקודות הבאות הן חיוניות:

1. גודל פיפטה וקצה: יש לבחור תמיד את הפיפטה בעלת הנפח הנומינלי הנמוך ביותר האפשרי והקצה הקטן ביותר כדי לשמור על כרית האוויר קטנה ככל האפשר. בעת פיפטה של ​​1 מיקרוליטר, לדוגמה, יש לבחור פיפטה של ​​0.25-2.5 מיקרוליטר וקצה תואם במקום פיפטה של ​​1-10 מיקרוליטר.
2. כיול ותחזוקה: חיוני שהפיפטות שלכם יכוילו ותתוחזקו כראוי. התאמות קטנות וחלקים שבורים בפיפטה מובילים לעלייה משמעותית בערכי שגיאה שיטתיים ואקראיים. כיול לפי תקן ISO 8655 חייב להתבצע פעם בשנה.
3. פיפטות תזוזה חיובית: בדקו אם יש לכם במעבדה פיפטה תזוזה חיובית עם טווח נפחים נמוך. באופן כללי, שימוש בסוג זה של פיפטה מוביל לתוצאת פיפטציה טובה יותר מבחינת דיוק ודיוק מאשר עם פיפטות כרית אוויר קלאסיות.
4. נסו להשתמש בנפחים גדולים יותר: ייתכן שתשקלו לדלל את הדגימה שלכם כדי לבצע פיפטה של ​​נפחים גדולים יותר עם אותה כמות בתגובה הסופית. זה יכול להפחית שגיאות פיפטה עם נפחי דגימה קטנים מאוד.

בנוסף לכלי טוב, על החוקר להיות בעל טכניקת פיפטה טובה מאוד. שימו לב במיוחד לשלבים הבאים:

1. חיבור קצה: אין להדביק את הפיפטה לקצה, שכן הדבר עלול לפגוע בקצה הקצה הדק ולגרום לקרן הנוזל להסיט את כיוון הכיוון או לפגוע בפתח. יש להפעיל לחץ קל בלבד בעת חיבור קצה ולהשתמש בפיפטה עם חרוט קצה קפיץ.
2. החזקת הפיפטה: אין להחזיק את הפיפטה ביד בזמן ההמתנה לצנטריפוגה, למחזור וכו'. פנים הפיפטה יתחמם ויגרום לכרית האוויר להתרחב, מה שיוביל לסטיות מהנפח שנקבע בעת הפיפטה.
3. הרטבה מוקדמת: לחות האוויר בתוך הקצה והפיפטה מכינה את הקצה לדגימה ומונעת אידוי בעת שאיבת נפח ההעברה.
4. שאיבה אנכית: זה חשוב מאוד בעת טיפול בנפחים קטנים כדי למנוע את האפקט הקפילרי המתרחש כאשר הפיפטה מוחזקת בזווית.
5. עומק טבילה: יש לטבול את הקצה כמה שפחות כדי למנוע חדירת נוזלים לקצה עקב אפקט נימי. כלל אצבע: ככל שהקצה והנפח קטנים יותר, כך עומק הטבילה נמוך יותר. אנו ממליצים על מקסימום של 2 מ"מ בעת פיפטה של ​​נפחים קטנים.
6. מזיגה בזווית של 45°: זרימה אופטימלית של הנוזל מובטחת כאשר הפיפטה מוחזקת בזווית של 45°.
7. מגע עם דופן הכלי או משטח הנוזל: ניתן למזוג כראוי כמויות קטנות רק כאשר הקצה מוחזק כנגד דופן הכלי, או טובל בנוזל. אפילו הטיפה האחרונה מהקצה יכולה להזוג במדויק.
8. ניפוח: יש לבצע ניפוח לאחר ניתוק כמויות נמוכות כדי להוציא אפילו את טיפת הנוזל האחרונה שנמצאת בקצה. יש לבצע את הניפוח גם כנגד דופן הכלי. יש להיזהר שלא להכניס בועות אוויר לדגימה בעת ביצוע ניפוח על פני הנוזל.