0,2 és 5 µL közötti térfogatok pipettázása esetén a pipettázási pontosság és precizitás rendkívül fontos, a jó pipettázási technika elengedhetetlen, mivel a kezelési hibák kis térfogatok esetén jobban észrevehetők.
Ahogy egyre nagyobb hangsúlyt fektetnek a reagensek és a költségek csökkentésére, egyre nagyobb az igény a kisebb térfogatokra, pl. PCR Mastermix vagy enzimreakciók elkészítéséhez. A 0,2–5 µL közötti kis térfogatok pipettázása azonban új kihívásokat jelent a pipettázás pontossága és precizitása szempontjából. A következő pontok lényegesek:
- Pipetta és hegy mérete: Mindig a lehető legkisebb névleges térfogatú és legkisebb hegyű pipettát válassza, hogy a légpárna a lehető legkisebb maradjon. Pl. 1 µL pipettázása esetén válasszon 0,25–2,5 µL-es pipettát és hozzá illő hegyet az 1–10 µL-es pipetta helyett.
- Kalibrálás és karbantartás: Alapvető fontosságú a pipetták megfelelő kalibrálása és karbantartása. A pipetták apró beállításai és törött alkatrészei a szisztematikus és véletlenszerű hibák értékének jelentős növekedéséhez vezetnek. Az ISO 8655 szabvány szerinti kalibrálást évente egyszer el kell végezni.
- Pozitív térfogatkiszorításos pipetták: Ellenőrizze, hogy van-e a laboratóriumában alacsony térfogattartományú pozitív térfogatkiszorításos pipettája. Általánosságban elmondható, hogy az ilyen típusú pipetta használata jobb pipettázási eredményt eredményez a pontosság és a precizitás tekintetében, mint a klasszikus légpárnás pipettákkal.
- Próbáljon meg nagyobb térfogatokat használni: Fontolóra veheti a minta hígítását, hogy a végső reakcióban nagyobb térfogatokat pipettázhasson ugyanazzal a mennyiséggel. Ez csökkentheti a pipettázási hibákat nagyon kis mintatérfogatok esetén.
A jó eszközön kívül a kutatónak nagyon jó pipettázási technikával is kell rendelkeznie. Fordítson különös figyelmet a következő lépésekre:
- Hegy rögzítése: Ne nyomja a pipettát a hegyre, mert ez károsíthatja a vékony hegyet, a folyadéksugár eltérülhet, vagy a nyílás is megsérülhet. A hegy felhelyezésekor csak enyhe nyomást alkalmazzon, és rugós kúpos hegyű pipettát használjon.
- A pipetta tartása: Ne tartsa a pipettát a kezében, amíg a centrifugára, a cyclerre stb. vár. A pipetta belseje felmelegszik, és a légpárna kitágul, ami pipettázáskor eltérést eredményez a beállított térfogattól.
- Előnedvesítés: A pipettahegy és a pipetta belsejében lévő levegő párásítása előkészíti a hegyet a mintára, és megakadályozza a párolgást az átviteli térfogat felszívásakor.
- Függőleges aspiráció: Ez nagyon fontos kis térfogatok kezelésekor, hogy elkerüljük a kapilláris hatást, amely akkor jelentkezik, amikor a pipetta ferdén van tartva.
- Merülési mélység: A kapillárishatás miatti folyadék bejutásának elkerülése érdekében a hegyet a lehető legkisebbre merítse folyadékba. Általános szabály: Minél kisebb a hegy és a térfogat, annál kisebb a merítési mélység. Kis térfogatok pipettázása esetén maximum 2 mm-es merítési mélységet javaslunk.
- Adagolás 45°-os szögben: A folyadék optimális kiáramlása garantált, ha a pipettát 45°-os szögben tartják.
- Érintkezés az edény falával vagy a folyadék felszínével: Kis mennyiségek csak akkor adhatók ki megfelelően, ha a hegyet az edény falához szorítják, vagy folyadékba merítik. Még az utolsó csepp is pontosan adagolható a hegyről.
- Kifúvás: Kis térfogatok adagolása után kötelező a kifúvás, hogy még az utolsó csepp folyadék is kiadagolható legyen a hegyen. A kifúvást az edény falával szemben kell végezni. Ügyeljen arra, hogy ne kerüljön légbuborék a mintába, amikor a folyadékfelszínen végez kifúvást.
Közzététel ideje: 2021. február 18.