जब 0.2 से 5 µL तक की मात्रा की पाइपिंग की जाती है, तो पाइपिंग की सटीकता और परिशुद्धता अत्यंत महत्वपूर्ण होती है, एक अच्छी पाइपिंग तकनीक आवश्यक है क्योंकि छोटी मात्रा के साथ हैंडलिंग गलतियाँ अधिक स्पष्ट होती हैं।
चूंकि अभिकर्मकों और लागतों को कम करने पर अधिक ध्यान दिया जा रहा है, इसलिए छोटी मात्रा की मांग अधिक है, उदाहरण के लिए, पीसीआर मास्टरमिक्स या एंजाइम प्रतिक्रियाओं की तैयारी के लिए। लेकिन 0.2 - 5 µL से छोटी मात्रा में पाइपिंग करने से पाइपिंग की सटीकता और परिशुद्धता के लिए नई चुनौतियाँ सामने आती हैं। निम्नलिखित बिंदु आवश्यक हैं:
- पिपेट और टिप का आकार: हमेशा सबसे कम नाममात्र मात्रा वाला पिपेट चुनें और हवा के कुशन को यथासंभव छोटा रखने के लिए सबसे छोटी टिप चुनें। 1 µL पिपेट करते समय, 1 - 10 µL पिपेट के बजाय 0.25 - 2.5 µL पिपेट और मैचिंग टिप चुनें।
- अंशांकन और रखरखाव: यह आवश्यक है कि आपके पिपेट को ठीक से अंशांकित और रखरखाव किया जाए। पिपेट पर छोटे समायोजन और टूटे हुए हिस्से व्यवस्थित और यादृच्छिक त्रुटि मूल्यों में भारी वृद्धि का कारण बनते हैं। ISO 8655 के अनुसार अंशांकन वर्ष में एक बार किया जाना चाहिए।
- सकारात्मक विस्थापन पिपेट: जाँच करें कि क्या आपके पास अपनी प्रयोगशाला में कम वॉल्यूम रेंज वाला सकारात्मक विस्थापन पिपेट है। सामान्य तौर पर, इस प्रकार के पिपेट का उपयोग करने से क्लासिक एयर-कुशन पिपेट की तुलना में सटीकता और परिशुद्धता के मामले में बेहतर पिपेटिंग परिणाम प्राप्त होता है।
- बड़ी मात्रा का उपयोग करने का प्रयास करें: आप अंतिम प्रतिक्रिया में समान मात्रा के साथ बड़ी मात्रा में पिपेट करने के लिए अपने नमूने को पतला करने पर विचार कर सकते हैं। यह बहुत छोटे नमूना मात्रा के साथ पिपेटिंग त्रुटियों को कम कर सकता है।
एक अच्छे उपकरण के अलावा, शोधकर्ता के पास एक बहुत अच्छी पाइपिंग तकनीक भी होनी चाहिए। निम्नलिखित चरणों पर विशेष ध्यान दें:
- टिप अटैचमेंट: पिपेट को टिप पर न दबाएं क्योंकि इससे फाइन टिप का सिरा क्षतिग्रस्त हो सकता है जिससे लिक्विड बीम पुनर्निर्देशित हो सकता है या छिद्र को नुकसान पहुंच सकता है। टिप लगाते समय केवल हल्का दबाव डालें और स्प्रिंग-लोडेड टिप कोन वाले पिपेट का उपयोग करें।
- पिपेट को पकड़ना: सेंट्रीफ्यूज, साइक्लर आदि का इंतजार करते समय पिपेट को अपने हाथ में न पकड़ें। पिपेट के अंदर का हिस्सा गर्म हो जाएगा और हवा के कुशन का विस्तार होगा, जिसके परिणामस्वरूप पाइपिंग करते समय निर्धारित मात्रा से विचलन होगा।
- पूर्व-गीलापन: टिप और पिपेट के अंदर हवा का आर्द्रीकरण, नमूने के लिए टिप को तैयार करता है और स्थानांतरण मात्रा को चूसते समय वाष्पीकरण से बचाता है।
- ऊर्ध्वाधर आकांक्षा: छोटे आयतन को संभालते समय यह बहुत महत्वपूर्ण है, क्योंकि इससे केशिका प्रभाव से बचा जा सकता है, जो पिपेट को कोण पर रखने पर उत्पन्न होता है।
- विसर्जन गहराई: केशिका प्रभाव के कारण तरल को टिप में प्रवेश करने से रोकने के लिए टिप को जितना संभव हो उतना कम डुबोएं। अंगूठे का नियम: टिप और वॉल्यूम जितना छोटा होगा, विसर्जन गहराई उतनी ही कम होगी। हम छोटे वॉल्यूम को पाइप करते समय अधिकतम 2 मिमी की सलाह देते हैं।
- 45° कोण पर वितरण: जब पिपेट को 45° कोण पर रखा जाता है तो तरल का इष्टतम प्रवाह सुनिश्चित होता है।
- बर्तन की दीवार या तरल सतह से संपर्क: छोटी मात्रा को तभी ठीक से वितरित किया जा सकता है जब टिप को बर्तन की दीवार के खिलाफ रखा जाए, या तरल में डुबोया जाए। टिप से आखिरी बूंद भी सटीक रूप से वितरित की जा सकती है।
- ब्लो-आउट: टिप में मौजूद तरल की आखिरी बूंद को निकालने के लिए कम मात्रा में डिस्पेंसिंग के बाद ब्लो-आउट अनिवार्य है। ब्लो-आउट को बर्तन की दीवार के खिलाफ भी किया जाना चाहिए। तरल सतह पर ब्लो-आउट करते समय सावधान रहें कि हवा के बुलबुले नमूने में न आएं।
पोस्ट करने का समय: फरवरी-18-2021