By it pipetterjen fan folumes fan 0,2 oant 5 µL is pipettearkrektens en presyzje fan it grutste belang. In goede pipetteartechnyk is essensjeel, om't ôfhannelingsflaters dúdliker binne by lytse folumes.
Om't der mear fokus lein wurdt op it ferminderjen fan reagentia en kosten, binne lytsere folumes yn hege fraach, bygelyks foar de tarieding fan PCR Mastermix of enzymreaksjes. Mar it pipetterjen fan lytse folumes fan 0,2 - 5 µL stelt nije útdagings foar pipetterkrektens en presyzje. De folgjende punten binne essensjeel:
- Pipet- en tipgrutte: Kies altyd de pipet mei it leechst mooglike nominale folume en de lytste tip om it luchtkessen sa lyts mooglik te hâlden. By it pipetterjen fan bygelyks 1 µL, kies dan in pipet fan 0,25 – 2,5 µL en in oerienkommende tip ynstee fan in pipet fan 1 – 10 µL.
- Kalibraasje en ûnderhâld: It is essinsjeel dat jo pipetten goed kalibrearre en ûnderhâlden wurde. Lytse oanpassingen en brutsen ûnderdielen op in pipette liede ta in massale tanimming fan systematyske en willekeurige flaterwearden. In kalibraasje neffens ISO 8655 moat ien kear yn 't jier útfierd wurde.
- Positive ferpleatsingspipetten: Kontrolearje oft jo in positive ferpleatsingspipette hawwe mei in leech folumeberik yn jo laboratoarium. Yn 't algemien liedt it brûken fan dit type pipette ta in better pipettearresultaat yn termen fan krektens en presyzje as mei klassike loftkussenpipetten.
- Besykje gruttere folumes te brûken: Jo kinne beskôgje om jo stekproef te ferdunnen om gruttere folumes mei deselde hoemannichte yn 'e definitive reaksje te pipetten. Dit kin pipettearfouten ferminderje mei heul lytse stekproefvolumes.
Neist in goed ark moat de ûndersiker in tige goede pipetteartechnyk hawwe. Jou spesjaal omtinken oan de folgjende stappen:
- Tipbefestiging: Druk de pipette net fêst op 'e tip, om't dit it fine tip-ein beskeadigje kin, wêrtroch't de floeistofstriel omlaat wurdt of de iepening beskeadige wurdt. Tapasse allinich lichte druk by it befestigjen fan in tip en brûk in pipette mei in fearbelaste tipkegel.
- De pipette fêsthâlde: Hâld de pipette net yn jo hân wylst jo wachtsje op de sintrifuge, cycler, ensfh. De binnenkant fan 'e pipette sil ferwaarmje en it loftkessen útwreidzje, wat resulteart yn ôfwikingen fan it ynstelde folume by it pipetterjen.
- Foarbevochtiging: De bevochtiging fan 'e loft yn' e tip en pipette bereidt de tip foar op it stekproef en foarkomt ferdamping by it aspirearjen fan it oerdrachtvolume.
- Fertikale aspiraasje: Dit is tige wichtich by it omgean mei lytse folumes om it kapillêre effekt te foarkommen dat optreedt as de pipette ûnder in hoeke hâlden wurdt.
- Djipte ûnderdompeling: Dompel de tip sa min mooglik ûnder om te foarkommen dat floeistof yn 'e tip komt fanwegen it kapillêre effekt. Fingerregel: Hoe lytser de tip en it folume, hoe leger de djipte ûnderdompeling. Wy advisearje in maksimum fan 2 mm by it pipetterjen fan lytse folumes.
- Dosearjen ûnder in hoeke fan 45°: Optimale útstream fan 'e floeistof is garandearre as de pipette ûnder in hoeke fan 45° hâlden wurdt.
- Kontakt mei de wand fan it fet of it floeibere oerflak: Lytse folumes kinne allinich goed útjûn wurde as de tip tsjin de wand fan it fet hâlden wurdt, of yn floeistof ûnderdompele wurdt. Sels de lêste drip fan 'e tip kin sekuer útjûn wurde.
- Útblaze: In útblaze is ferplicht nei it dosearjen fan lege folumes om sels de lêste drip floeistof yn 'e tip te dosearjen. It útblazen moat ek tsjin 'e wand fan it fet útfierd wurde. Wês foarsichtich dat der gjin luchtbellen yn it monster komme as jo in útblaze oan it floeistofoerflak útfiere.
Pleatsingstiid: 18 febrewaris 2021