Kun pipetoidaan 0,2–5 µl:n tilavuuksia, pipetoinnin tarkkuus ja täsmällisyys ovat äärimmäisen tärkeitä. Hyvä pipetointitekniikka on olennainen, koska käsittelyvirheet ovat ilmeisempiä pienten tilavuuksien kanssa.
Reagenssien ja kustannusten vähentämiseen keskitytään yhä enemmän, joten pienemmät tilavuudet ovat erittäin kysyttyjä esimerkiksi PCR-pääseoksen tai entsyymireaktioiden valmistuksessa. Pienten, 0,2–5 µl:n tilavuuksien pipetointi asettaa kuitenkin uusia haasteita pipetoinnin tarkkuudelle ja täsmällisyydelle. Seuraavat seikat ovat olennaisia:
- Pipetin ja kärjen koko: Valitse aina pipetti, jolla on pienin mahdollinen nimellistilavuus ja pienin kärki, jotta ilmatyyny pysyy mahdollisimman pienenä. Kun pipetoit esimerkiksi 1 µl, valitse 0,25–2,5 µl pipetti ja sopiva kärki 1–10 µl pipetin sijaan.
- Kalibrointi ja huolto: On tärkeää, että pipettisi kalibroidaan ja huolletaan oikein. Pipetin pienet säädöt ja rikkoutuneet osat johtavat systemaattisten ja satunnaisten virhearvojen huomattavaan kasvuun. ISO 8655 -standardin mukainen kalibrointi on suoritettava kerran vuodessa.
- Positiivisen syrjäytyksen pipetit: Tarkista, onko laboratoriossasi positiivisen syrjäytyksen pipettiä, jolla on pieni tilavuusalue. Yleisesti ottaen tämän tyyppisen pipetin käyttö johtaa parempaan pipetointitulokseen tarkkuuden ja täsmällisyyden suhteen kuin klassiset ilmatyynypipetit.
- Kokeile käyttää suurempia tilavuuksia: Voit harkita näytteen laimentamista pipetoidaksesi suurempia tilavuuksia samalla määrällä loppureaktiossa. Tämä voi vähentää pipetointivirheitä erittäin pienillä näytetilavuuksilla.
Hyvän työkalun lisäksi tutkijalla on oltava erittäin hyvä pipetointitekniikka. Kiinnitä erityistä huomiota seuraaviin vaiheisiin:
- Kärjen kiinnitys: Älä paina pipettiä kärkeen, sillä se voi vahingoittaa ohutta kärkeä, nestesuihkua muuttaa suuntaa tai aukkoa. Käytä vain kevyttä painetta kärkeä kiinnittäessäsi ja käytä pipettiä, jossa on jousikuormitettu kärkikartio.
- Pipetin pitäminen: Älä pidä pipettiä kädessäsi odottaessasi sentrifugia, sykleriä tms. Pipetin sisäosa kuumenee ja saa ilmatyynyn laajenemaan, mikä johtaa poikkeamiin asetetusta tilavuudesta pipetoitaessa.
- Esikostutus: Kärjen ja pipetin sisällä olevan ilman kostuttaminen valmistelee kärjen näytettä varten ja estää haihtumisen siirtotilavuuden imemisen aikana.
- Pystysuuntainen imu: Tämä on erittäin tärkeää käsiteltäessä pieniä määriä, jotta vältetään kapillaarivaikutus, joka syntyy, kun pipettiä pidetään kulmassa.
- Upotussyvyys: Upota kärkeä mahdollisimman vähän veteen, jotta nestettä ei pääse kärkeen kapillaarivaikutuksen vuoksi. Nyrkkisääntö: Mitä pienempi kärki ja tilavuus, sitä pienempi upotussyvyys. Pieniä määriä pipetoinnissa suosittelemme enintään 2 mm:n upotussyvyyttä.
- Annostelu 45° kulmassa: Nesteen optimaalinen virtaus on taattu, kun pipettiä pidetään 45° kulmassa.
- Kosketus astian seinämään tai nestepintaan: Pieniä määriä voidaan annostella oikein vain, kun kärkeä pidetään astian seinämää vasten tai se on upotettu nesteeseen. Jopa viimeinen pisara kärjestä voidaan annostella tarkasti.
- Puhallus: Puhallus on pakollinen pienten nestemäärien annostelun jälkeen, jotta kärjessä oleva viimeinenkin nestepisara saadaan annosteltua. Puhallus on suoritettava astian seinämää vasten. Varo, ettei näytteeseen pääse ilmakuplia, kun suoritat puhalluksen nesteen pinnalla.
Julkaisun aika: 18. helmikuuta 2021