Cumu pipettà picculi volumi cù pipette manuali portatili

Cù una maggiore attenzione à a riduzione di i reagenti è di i costi, i volumi più chjuchi sò assai richiesti, per esempiu, per a preparazione di PCR Mastermix o di reazioni enzimatiche. Ma u pipettaggio di picculi volumi da 0,2 à 5 µL pone novi sfide per l'accuratezza è a precisione di u pipettaggio. I punti seguenti sò essenziali:

1. Dimensione di a pipetta è di a punta: Sceglite sempre a pipetta cù u vulume nominale u più bassu pussibule è a punta a più chjuca per mantene u cuscinu d'aria u più chjucu pussibule. Quandu si pipetta 1 µL, per esempiu, sceglite una pipetta da 0,25 à 2,5 µL è una punta currispundente invece di una pipetta da 1 à 10 µL.
2. Calibrazione è manutenzione: Hè essenziale chì e vostre pipette sianu calibrate è mantenute currettamente. Picculi aghjustamenti è pezzi rotti nantu à una pipetta portanu à un aumentu massivu di i valori d'errore sistematicu è aleatoriu. Una calibrazione secondu a norma ISO 8655 deve esse effettuata una volta à l'annu.
3. Pipette à spustamentu pusitivu: Verificate s'è vo avete una pipetta à spustamentu pusitivu cù una gamma di vulume bassa in u vostru laburatoriu. In generale, l'usu di stu tipu di pipetta porta à un risultatu di pipettaggio megliu in termini di accuratezza è precisione chè cù e pipette classiche à cuscinu d'aria.
4. Pruvate à aduprà volumi più grandi: Pudete cunsiderà di diluisce u vostru campione per pipettà volumi più grandi cù a stessa quantità in a reazione finale. Questu pò riduce l'errori di pipettaggio cù volumi di campione assai chjuchi.

In più di un bon strumentu, u ricercatore deve avè una tecnica di pipettaggio assai bona. Fate una attenzione particulare à i seguenti passi:

1. Attaccu di a punta: Ùn incastrate micca a pipetta nantu à a punta perchè questu puderia dannighjà a punta fina, fà chì u fasciu di liquidu sia ridirezionatu o dannighjà l'orifiziu. Applicate solu una pressione ligera quandu attaccate una punta è aduprate una pipetta cù un conu di punta caricatu à molla.
2. Tenendu a pipetta: Ùn tene micca a pipetta in manu mentre aspettate a centrifuga, u ciclatore, ecc. L'internu di a pipetta si riscalderà è farà chì u cuscinu d'aria si espanda, pruvucendu deviazioni da u vulume impostu durante u pipettaggio.
3. Pre-umidificazione: L'umidificazione di l'aria in l'internu di a punta è di a pipetta prepara a punta per u campione è evita l'evaporazione quandu si aspira u vulume di trasferimentu.
4. Aspirazione verticale: Questu hè assai impurtante quandu si manipulanu picculi volumi per evità l'effettu capillare chì si verifica quandu a pipetta hè tenuta à un angulu.
5. Prufundità d'immersione: Immergete a punta u menu pussibule per impedisce chì u liquidu entre in a punta per via di l'effettu capillare. Regula generale: Più chjuca hè a punta è u vulume, più bassa hè a prufundità d'immersione. Ricumandemu un massimu di 2 mm quandu si pipettanu picculi vulumi.
6. Dispensazione à un angulu di 45°: U flussu ottimale di u liquidu hè garantitu quandu a pipetta hè tenuta à un angulu di 45°.
7. Cuntattu cù a parete di u vasu o a superficia di u liquidu: I picculi volumi ponu esse dispensati currettamente solu quandu a punta hè tenuta contr'à a parete di u vasu, o immersa in u liquidu. Ancu l'ultima goccia da a punta pò esse dispensata cù precisione.
8. Soffiu: Un soffiu hè ubligatoriu dopu avè dispensatu bassi volumi per dispensà ancu l'ultima goccia di liquidu presente in a punta. U soffiu deve ancu esse effettuatu contr'à a parete di u vasu. Fate attenzione à ùn purtà bolle d'aria in u campione quandu si esegue un soffiu nantu à a superficia di u liquidu.