При пипетиране на обеми от 0,2 до 5 µL, точността и прецизността на пипетирането са от изключителна важност. Добрата техника на пипетиране е от съществено значение, тъй като грешките при работа са по-очевидни при малки обеми.
Тъй като се обръща все повече внимание на намаляването на реагентите и разходите, по-малките обеми са с голямо търсене, например за приготвяне на PCR Mastermix или ензимни реакции. Но пипетирането на малки обеми от 0,2 – 5 µL поставя нови предизвикателства за точността и прецизността на пипетирането. Следните точки са от съществено значение:
- Размер на пипета и накрайник: Винаги избирайте пипета с възможно най-малък номинален обем и най-малък накрайник, за да поддържате въздушната възглавница възможно най-малка. Когато пипетирате например 1 µL, изберете пипета с обем 0,25 – 2,5 µL и съответстващ накрайник, вместо пипета с обем 1 – 10 µL.
- Калибриране и поддръжка: От съществено значение е вашите пипети да бъдат правилно калибрирани и поддържани. Малки настройки и счупени части по пипетата водят до значително увеличение на стойностите на систематичните и случайните грешки. Калибрирането съгласно ISO 8655 трябва да се извършва веднъж годишно.
- Пипети с положително изместване: Проверете дали имате пипета с положително изместване с нисък обемен диапазон във вашата лаборатория. Като цяло, използването на този тип пипета води до по-добър резултат от пипетирането по отношение на точност и прецизност, отколкото с класическите пипети с въздушна възглавница.
- Опитайте се да използвате по-големи обеми: Може да обмислите разреждане на пробата си, за да пипетирате по-големи обеми със същото количество в крайната реакция. Това може да намали грешките при пипетиране с много малки обеми на пробите.
В допълнение към добрия инструмент, изследователят трябва да притежава много добра техника на пипетиране. Обърнете специално внимание на следните стъпки:
- Закрепване на върха: Не затягайте пипетата върху върха, тъй като това може да повреди финия край на върха, да пренасочи течния лъч или да повреди отвора. Прилагайте само лек натиск при закрепване на върха и използвайте пипета с пружинен конус.
- Държане на пипетата: Не дръжте пипетата в ръка, докато чакате центрофугата, циклера и др. Вътрешността на пипетата ще се нагрее и ще доведе до разширяване на въздушната възглавница, което ще доведе до отклонения от зададения обем при пипетиране.
- Предварително овлажняване: Овлажняването на въздуха във вътрешността на върха и пипетата подготвя върха за пробата и предотвратява изпаряването при аспириране на трансферния обем.
- Вертикална аспирация: Това е много важно при работа с малки обеми, за да се избегне капилярен ефект, който възниква, когато пипетата се държи под ъгъл.
- Дълбочина на потапяне: Потопете върха възможно най-малко, за да предотвратите навлизането на течност във върха поради капилярен ефект. Емпирично правило: Колкото по-малък е върхът и обемът, толкова по-малка е дълбочината на потапяне. Препоръчваме максимум 2 мм при пипетиране на малки обеми.
- Дозиране под ъгъл от 45°: Оптималното изтичане на течността е гарантирано, когато пипетата се държи под ъгъл от 45°.
- Контакт със стената на съда или повърхността на течността: Малки обеми могат да бъдат правилно дозирани само когато накрайникът се държи до стената на съда или се потапя в течност. Дори последната капка от върха може да бъде дозирана точно.
- Продухване: Продухването е задължително след дозиране на малки обеми, за да се дозира дори последната капка течност, намираща се в накрайника. Продухването трябва да се извършва и срещу стената на съда. Внимавайте да не внесете въздушни мехурчета в пробата, когато извършвате продухване от повърхността на течността.
Време на публикуване: 18 февруари 2021 г.