Пры піпетаванні аб'ёмаў ад 0,2 да 5 мкл дакладнасць і прэцызійнасць маюць першараднае значэнне, а таксама добрая тэхніка піпетавання, паколькі памылкі ў апрацоўцы больш відавочныя пры малых аб'ёмах.
Паколькі ўсё большая ўвага надаецца скарачэнню рэагентаў і выдаткаў, вялікі попыт на меншыя аб'ёмы, напрыклад, для падрыхтоўкі ПЛР-мастэр-міксу або ферментатыўных рэакцый. Але піпетаванне невялікіх аб'ёмаў ад 0,2 да 5 мкл стварае новыя праблемы для дакладнасці і прэцызійнасці піпетавання. Істотныя наступныя моманты:
- Памер піпеткі і наканечніка: заўсёды выбірайце піпетку з найменшым магчымым намінальным аб'ёмам і самым маленькім наканечнікам, каб паветраная падушачка была як мага меншай. Пры піпетцы, напрыклад, 1 мкл, выбірайце піпетку аб'ёмам 0,25–2,5 мкл і адпаведны наканечнік, а не піпетку аб'ёмам 1–10 мкл.
- Каліброўка і абслугоўванне: Вельмі важна правільна адкалібраваць і абслугоўваць піпеткі. Невялікія карэкціроўкі і пашкоджаныя дэталі піпеткі прыводзяць да значнага павелічэння сістэматычных і выпадковых памылак. Каліброўка ў адпаведнасці са стандартам ISO 8655 павінна праводзіцца адзін раз на год.
- Піпеткі з аб'ёмным ціскам: праверце, ці ёсць у вашай лабараторыі піпетка з аб'ёмным ціскам з малым дыяпазонам аб'ёмаў. Як правіла, выкарыстанне гэтага тыпу піпеткі прыводзіць да лепшых вынікаў піпетавання з пункту гледжання дакладнасці і прэцызійнасці, чым класічныя піпеткі на паветранай падушцы.
- Паспрабуйце выкарыстоўваць большыя аб'ёмы: вы можаце развесці ўзор, каб прапіпетаваць большыя аб'ёмы з такой жа колькасцю ў канчатковай рэакцыі. Гэта можа паменшыць памылкі піпетавання пры вельмі малых аб'ёмах узораў.
Акрамя добрага інструмента, даследчык павінен мець вельмі добрую тэхніку піпетавання. Звярніце асаблівую ўвагу на наступныя крокі:
- Мацаванне наканечніка: Не прыціскайце піпетку да наканечніка, бо гэта можа пашкодзіць тонкі канец наканечніка, прывесці да перанакіравання струменя вадкасці або пашкоджання адтуліны. Пры мацанні наканечніка націскайце толькі злёгку і выкарыстоўвайце піпетку з спружынным конусам наканечніка.
- Трыманне піпеткі: Не трымайце піпетку ў руцэ, пакуль чакаеце цэнтрыфугу, цыклер і г.д. Унутраная частка піпеткі награваецца і прыводзіць да пашырэння паветранай падушкі, што прыводзіць да адхіленняў ад зададзенага аб'ёму пры піпетаванні.
- Папярэдняе ўвільгатненне: ўвільгатненне паветра ўнутры наканечніка і піпеткі падрыхтоўвае наканечнік да ўзору і прадухіляе выпарэнне пры аспірацыі перанесенага аб'ёму.
- Вертыкальная аспірацыя: гэта вельмі важна пры працы з невялікімі аб'ёмамі, каб пазбегнуць капілярнага эфекту, які ўзнікае, калі піпетку трымаюць пад вуглом.
- Глыбіня апускання: апускайце наканечнік як мага менш, каб прадухіліць трапленне вадкасці ўнутр з-за капілярнага эфекту. Эмпірычнае правіла: чым меншы наканечнік і аб'ём, тым меншая глыбіня апускання. Пры піпетаванні невялікіх аб'ёмаў рэкамендуецца максімум 2 мм.
- Дазаванне пад вуглом 45°: аптымальны адток вадкасці гарантаваны, калі піпетку трымаць пад вуглом 45°.
- Кантакт са сценкай пасудзіны або паверхняй вадкасці: невялікія аб'ёмы можна правільна размеркаваць толькі тады, калі наканечнік трымаецца ля сценкі пасудзіны або апускаецца ў вадкасць. Нават апошняя кропля з наканечніка можа быць дакладна размеркавана.
- Прадзімка: пасля выдачы невялікіх аб'ёмаў абавязкова прадзімка, каб выдаць нават апошнюю кроплю вадкасці, якая знаходзіцца ў наканечніку. Прадзімку таксама варта праводзіць каля сценкі пасудзіны. Будзьце асцярожныя, каб не ўнесці бурбалкі паветра ў пробу пры прадзімцы каля паверхні вадкасці.
Час публікацыі: 18 лютага 2021 г.