如何使用手持式手动移液器进行小体积移液

随着人们越来越重视减少试剂用量和成本，更小体积的需求日益增长，例如用于制备 PCR Mastermix 或酶反应。然而，0.2 至 5 µL 的小体积移液对移液的准确性和精密度提出了新的挑战。以下几点至关重要：

1. 移液器和吸头尺寸：务必选择标称容量尽可能小且吸头尺寸尽可能小的移液器，以尽可能减少气垫。例如，移取 1 µL 液体时，应选择 0.25 – 2.5 µL 的移液器和配套的吸头，而不是 1 – 10 µL 的移液器。
2. 校准和维护：正确校准和维护您的移液器至关重要。移液器上的细微调整和部件损坏会导致系统误差和随机误差值大幅增加。必须每年根据 ISO 8655 标准进行一次校准。
3. 容积式移液器：请检查您的实验室是否有容积式移液器，其容量范围较小。通常，使用这种移液器，其准确度和精密度比传统的气垫式移液器更高。
4. 尽量使用更大的体积：您可以考虑稀释样品，以便在最终反应中以相同的量移取更大的体积。这可以减少样品量过小导致的移液误差。

除了好的工具外，研究人员还必须具备良好的移液技术。请特别注意以下步骤：

1. 吸头安装：请勿将移液器硬塞到吸头上，因为这可能会损坏吸头的细端，导致液体光束改变方向或损坏吸嘴。安装吸头时，请仅施加轻微压力，并使用带有弹簧吸头锥的移液器。
2. 握持移液器：等待离心机、循环仪等仪器时​​，请勿将移液器握在手中，否则移液器内部会发热，导致气垫膨胀，造成移液时设定体积出现偏差。
3. 预湿：吸头和移液器内部空气的加湿为吸头吸取样品做好准备，并避免吸取转移体积时发生蒸发。
4. 垂直抽吸：处理少量液体时，这一点非常重要，可以避免移液器倾斜时产生的毛细管效应。
5. 浸入深度：尽量减少枪头浸入深度，以防止液体因毛细管效应进入枪头。经验法则：枪头越小，体积越小，浸入深度越低。我们建议小体积移液时，浸入深度最大为 2 毫米。
6. 以 45° 角分配：当移液器以 45° 角握住时，可保证液体的最佳流出。
7. 接触容器壁或液体表面：只有将吸头贴着容器壁或浸入液体中，才能正确分配少量液体。即使是吸头中的最后一滴液体，也能准确分配。
8. 吹液：少量分液后必须吹液，直至吸头中最后一滴液体排出。吹液时，应紧贴容器壁进行。在液面吹液时，注意不要将气泡带入样品中。