Під час піпетування об'ємів від 0,2 до 5 мкл точність і прецизійність піпетування мають першорядне значення, а також належна техніка піпетування є важливою, оскільки помилки обробки більш очевидні при малих об'ємах.
Оскільки все більше уваги приділяється зменшенню кількості реагентів та витрат, попит на менші об'єми стає високим, наприклад, для приготування ПЛР-мастер-міксу або ферментних реакцій. Але піпетування невеликих об'ємів від 0,2 до 5 мкл ставить нові виклики для точності та прецизійності піпетування. Наступні моменти є важливими:
- Розмір піпетки та наконечника: Завжди вибирайте піпетку з найменшим можливим номінальним об'ємом та найменшим наконечником, щоб повітряна подушка була якомога меншою. Наприклад, під час піпетування 1 мкл, вибирайте піпетку об'ємом 0,25–2,5 мкл та відповідний наконечник, а не піпетку об'ємом 1–10 мкл.
- Калібрування та обслуговування: Вкрай важливо, щоб ваші піпетки були належним чином відкалібровані та обслуговувалися. Невеликі коригування та зламані деталі піпетки призводять до значного збільшення систематичних та випадкових похибок. Калібрування відповідно до ISO 8655 необхідно проводити раз на рік.
- Піпетки об'ємного типу: перевірте, чи є у вашій лабораторії піпетка об'ємного типу з малим діапазоном об'ємів. Загалом, використання цього типу піпетки призводить до кращого результату піпетування з точки зору точності та прецизійності, ніж класичні піпетки на повітряній подушці.
- Намагайтеся використовувати більші об'єми: Ви можете розглянути можливість розведення зразка, щоб піпетувати більші об'єми з такою ж кількістю в кінцевій реакції. Це може зменшити помилки піпетування з дуже малими об'ємами зразків.
Окрім хорошого інструменту, дослідник повинен мати дуже добру техніку піпетування. Зверніть особливу увагу на наступні кроки:
- Кріплення наконечника: Не затискайте піпетку на наконечнику, оскільки це може пошкодити тонкий кінець наконечника, що призведе до перенаправлення струменя рідини або пошкодження отвору. Під час приєднання наконечника натискайте лише злегка та використовуйте піпетку з пружинним конусом наконечника.
- Тримання піпетки: Не тримайте піпетку в руці, поки чекаєте на центрифугу, циклер тощо. Внутрішня частина піпетки нагріватиметься та призведе до розширення повітряної подушки, що призведе до відхилень від встановленого об'єму під час піпетування.
- Попереднє зволоження: Зволоження повітря всередині наконечника та піпетки готує наконечник до зразка та запобігає випаровуванню під час аспірації перенесеного об'єму.
- Вертикальна аспірація: це дуже важливо при роботі з невеликими об'ємами, щоб уникнути капілярного ефекту, який виникає, коли піпетку тримають під кутом.
- Глибина занурення: Занурюйте наконечник якомога менше, щоб запобігти потраплянню рідини в наконечник через капілярний ефект. Емпіричне правило: чим менший наконечник і його об'єм, тим менша глибина занурення. Ми рекомендуємо максимум 2 мм під час піпетування невеликих об'ємів.
- Дозування під кутом 45°: Оптимальний потік рідини гарантується, коли піпетку тримати під кутом 45°.
- Контакт зі стінкою посудини або поверхнею рідини: Невеликі об'єми можна правильно дозувати лише тоді, коли наконечник тримається біля стінки посудини або занурюється в рідину. Навіть останню краплю з наконечника можна дозувати точно.
- Продування: Продування є обов'язковим після дозування невеликих об'ємів, щоб видалити навіть останню краплю рідини, що знаходиться в наконечнику. Продування також слід проводити вздовж стінки посудини. Будьте обережні, щоб не потрапити бульбашки повітря у зразок під час продування поверхні рідини.
Час публікації: 18 лютого 2021 р.