0,2 ila 5 µL hacimlerde pipetleme yaparken, pipetleme doğruluğu ve hassasiyeti son derece önemlidir. İyi bir pipetleme tekniği şarttır çünkü küçük hacimlerde kullanım hataları daha belirgindir.
Reaktifleri ve maliyetleri azaltmaya daha fazla odaklanıldıkça, daha küçük hacimlere olan talep artıyor, örneğin PCR Mastermix veya enzim reaksiyonlarının hazırlanması için. Ancak 0,2 – 5 µL'lik küçük hacimlerin pipetlenmesi, pipetleme doğruluğu ve hassasiyeti için yeni zorluklar ortaya çıkarıyor. Aşağıdaki noktalar önemlidir:
- Pipet ve uç boyutu: Hava yastığını olabildiğince küçük tutmak için her zaman mümkün olan en düşük nominal hacme ve en küçük uca sahip pipeti seçin. Örneğin 1 µL pipetleme yaparken 1 – 10 µL pipet yerine 0,25 – 2,5 µL pipet ve eşleşen uç seçin.
- Kalibrasyon ve bakım: Pipetlerinizin düzgün bir şekilde kalibre edilmesi ve bakımının yapılması esastır. Bir pipetteki küçük ayarlamalar ve kırık parçalar sistematik ve rastgele hata değerlerinde büyük bir artışa yol açar. ISO 8655'e göre kalibrasyon yılda bir kez yapılmalıdır.
- Pozitif deplasmanlı pipetler: Laboratuvarınızda düşük hacim aralığına sahip pozitif deplasmanlı bir pipet olup olmadığını kontrol edin. Genel olarak, bu tip pipet kullanmak, klasik hava yastıklı pipetlere göre doğruluk ve hassasiyet açısından daha iyi bir pipetleme sonucu verir.
- Daha büyük hacimler kullanmayı deneyin: Son reaksiyonda aynı miktarda daha büyük hacimleri pipetlemek için örneğinizi seyreltmeyi düşünebilirsiniz. Bu, çok küçük örnek hacimlerinde pipetleme hatalarını azaltabilir.
İyi bir alete ek olarak, araştırmacının çok iyi bir pipetleme tekniğine sahip olması gerekir. Aşağıdaki adımlara özellikle dikkat edin:
- Uç bağlantısı: Pipeti uca sıkıştırmayın, çünkü bu ince uç ucuna zarar verebilir, sıvı ışınının yeniden yönlendirilmesine veya deliğin hasar görmesine neden olabilir. Bir ucu takarken yalnızca hafif bir baskı uygulayın ve yaylı uç konisi olan bir pipet kullanın.
- Pipetin tutulması: Santrifüj, devir daim cihazı vb. çalışırken pipeti elinizde tutmayın. Pipetin içi ısınır ve hava yastığının genişlemesine yol açarak pipetleme sırasında ayarlanan hacimden sapmalara neden olur.
- Ön ıslatma: Uç ve pipet içindeki havanın nemlendirilmesi, ucu numuneye hazırlar ve transfer hacminin aspire edilmesi sırasında buharlaşmayı önler.
- Dikey aspirasyon: Küçük hacimlerle çalışırken pipet açılı tutulduğunda oluşan kılcal etkiyi önlemek için bu çok önemlidir.
- Daldırma derinliği: Kılcal etki nedeniyle sıvının uca girmesini önlemek için ucu mümkün olduğunca az daldırın. Genel kural: Uç ve hacim ne kadar küçükse, daldırma derinliği o kadar düşük olur. Küçük hacimlerde pipetleme yaparken maksimum 2 mm öneriyoruz.
- 45° açıyla dağıtım: Pipet 45° açıyla tutulduğunda sıvının optimum şekilde akması garanti edilir.
- Kap duvarına veya sıvı yüzeyine temas: Küçük hacimler yalnızca uç kap duvarına tutulduğunda veya sıvıya daldırıldığında düzgün bir şekilde dağıtılabilir. Uçtan gelen son damla bile doğru bir şekilde dağıtılabilir.
- Üfleme: Uçta bulunan son damla sıvıyı bile dağıtmak için düşük hacimlerde dağıtımdan sonra üfleme zorunludur. Üfleme ayrıca kap duvarına karşı yapılmalıdır. Sıvı yüzeyinde üfleme yaparken numuneye hava kabarcıkları getirmemeye dikkat edin.
Gönderi zamanı: 18-Şub-2021