เมื่อปิเปตมีปริมาตรตั้งแต่ 0.2 ถึง 5 µL ความถูกต้องและแม่นยำในการปิเปตถือเป็นสิ่งสำคัญที่สุด เทคนิคการปิเปตที่ดีมีความจำเป็น เนื่องจากข้อผิดพลาดในการจัดการจะเห็นได้ชัดขึ้นเมื่อปิเปตมีปริมาตรน้อย
เนื่องจากมีการให้ความสำคัญกับการลดปริมาณสารเคมีและต้นทุนมากขึ้น จึงทำให้มีความต้องการผลิตภัณฑ์ที่มีปริมาณน้อยลง เช่น สำหรับการเตรียม PCR Mastermix หรือปฏิกิริยาเอนไซม์ แต่การปิเปตด้วยปริมาณที่น้อยลงตั้งแต่ 0.2 ถึง 5 µL ก่อให้เกิดความท้าทายใหม่ในด้านความถูกต้องและความแม่นยำของการปิเปต ประเด็นต่อไปนี้มีความสำคัญ:
- ขนาดปิเปตและหัวบีบ: ควรเลือกปิเปตที่มีปริมาตรน้อยที่สุดเท่าที่จะเป็นไปได้และหัวบีบมีขนาดเล็กที่สุดเพื่อให้มีช่องว่างอากาศน้อยที่สุดเท่าที่จะเป็นไปได้ เมื่อปิเปต 1 µL เช่น ให้เลือกปิเปตขนาด 0.25 – 2.5 µL และหัวบีบที่เข้าชุดกัน แทนที่จะใช้ปิเปตขนาด 1 – 10 µL
- การสอบเทียบและการบำรุงรักษา: การสอบเทียบและการบำรุงรักษาปิเปตของคุณอย่างถูกต้องถือเป็นสิ่งสำคัญ การปรับเพียงเล็กน้อยและชิ้นส่วนที่แตกหักบนปิเปตจะทำให้ค่าความผิดพลาดเชิงระบบและแบบสุ่มเพิ่มขึ้นอย่างมาก การสอบเทียบตามมาตรฐาน ISO 8655 จะต้องดำเนินการอย่างน้อยปีละครั้ง
- ปิเปตแบบปริมาตรคงที่: ตรวจสอบว่าคุณมีปิเปตแบบปริมาตรคงที่ที่มีช่วงปริมาตรต่ำในห้องแล็บของคุณหรือไม่ โดยทั่วไปแล้ว การใช้ปิเปตประเภทนี้จะทำให้ได้ผลลัพธ์การปิเปตที่มีความแม่นยำและแม่นยำมากกว่าการใช้ปิเปตแบบเบาะลมทั่วไป
- พยายามใช้ปริมาณที่มากขึ้น: คุณอาจพิจารณาเจือจางตัวอย่างของคุณเพื่อปิเปตปริมาณที่มากขึ้นด้วยปริมาณที่เท่ากันในการทำปฏิกิริยาขั้นสุดท้าย วิธีนี้สามารถลดข้อผิดพลาดในการปิเปตได้ในกรณีที่ตัวอย่างมีปริมาณน้อยมาก
นอกจากเครื่องมือที่ดีแล้ว นักวิจัยยังต้องมีเทคนิคการปิเปตที่ดีมากอีกด้วย ควรใส่ใจเป็นพิเศษกับขั้นตอนต่อไปนี้:
- การติดปลายหลอด: ห้ามติดปิเปตเข้ากับปลายหลอด เพราะอาจทำให้ปลายหลอดเล็กเสียหาย ส่งผลให้ลำแสงของเหลวเปลี่ยนทิศทาง หรือทำให้รูรั่วเสียหายได้ ให้ใช้แรงกดเบาๆ เท่านั้นเมื่อติดปลายหลอด และใช้ปิเปตที่มีกรวยปลายหลอดแบบสปริง
- การจับปิเปต: ห้ามถือปิเปตในมือในขณะที่รอเครื่องเหวี่ยง เครื่องปั่นจักรยาน ฯลฯ เพราะภายในปิเปตจะร้อนขึ้นและทำให้ถุงลมขยายตัว ส่งผลให้ปริมาตรที่ตั้งค่าไว้เมื่อทำการปิเปตคลาดเคลื่อนไปจากค่าที่ตั้งไว้
- การทำให้เปียกล่วงหน้า: การเพิ่มความชื้นของอากาศภายในทิปและปิเปตช่วยเตรียมทิปสำหรับตัวอย่างและหลีกเลี่ยงการระเหยเมื่อดูดปริมาตรที่ถ่ายโอน
- การดูดแนวตั้ง: สิ่งนี้สำคัญมากเมื่อต้องจัดการกับปริมาตรขนาดเล็ก เพื่อหลีกเลี่ยงเอฟเฟกต์เส้นเลือดฝอยที่เกิดขึ้นเมื่อถือปิเปตในมุมเอียง
- ความลึกในการจุ่ม: จุ่มปลายทิปให้น้อยที่สุดเท่าที่จะทำได้เพื่อป้องกันไม่ให้ของเหลวเข้าไปในปลายทิปอันเนื่องมาจากผลของเส้นเลือดฝอย หลักเกณฑ์ง่ายๆ: ยิ่งปลายทิปและปริมาตรเล็กลง ความลึกในการจุ่มก็จะยิ่งต่ำลง เราขอแนะนำให้จุ่มปลายทิปไม่เกิน 2 มม. เมื่อปิเปตปริมาตรน้อย
- การจ่ายในมุม 45°: รับประกันการไหลออกของของเหลวที่เหมาะสมที่สุดเมื่อถือปิเปตในมุม 45°
- การสัมผัสกับผนังภาชนะหรือพื้นผิวของเหลว: สามารถจ่ายของเหลวปริมาณเล็กน้อยได้อย่างเหมาะสมเมื่อถือปลายทิปไว้กับผนังภาชนะหรือจุ่มลงในของเหลว แม้แต่หยดสุดท้ายจากปลายทิปก็สามารถจ่ายได้อย่างแม่นยำ
- การเป่า: การเป่าเป็นสิ่งจำเป็นหลังจากจ่ายของเหลวปริมาณน้อยเพื่อจ่ายของเหลวแม้แต่หยดสุดท้ายที่มีอยู่ในปลายหัวฉีด การเป่าควรทำโดยเป่าไปที่ผนังภาชนะด้วย ระวังอย่าให้ฟองอากาศเข้าไปในตัวอย่างเมื่อเป่าที่ผิวของเหลว
เวลาโพสต์ : 18 ก.พ. 2564