Cum se pipetează volume mici cu pipete manuale portabile

Întrucât se pune tot mai mult accent pe reducerea reactivilor și a costurilor, volumele mai mici sunt la mare căutare, de exemplu, pentru prepararea Mastermix-ului PCR sau a reacțiilor enzimatice. Însă pipetarea unor volume mici, de la 0,2 la 5 µL, creează noi provocări pentru acuratețea și precizia pipetării. Următoarele puncte sunt esențiale:

1. Dimensiunea pipetei și a vârfului: Alegeți întotdeauna pipeta cu cel mai mic volum nominal posibil și cel mai mic vârf pentru a menține perna de aer cât mai mică posibil. Când pipetați 1 µL, de exemplu, alegeți o pipetă de 0,25 – 2,5 µL și un vârf corespunzător, în loc de o pipetă de 1 – 10 µL.
2. Calibrare și întreținere: Este esențial ca pipetele dumneavoastră să fie calibrate și întreținute corespunzător. Micile ajustări și piesele defecte ale unei pipete duc la o creștere masivă a valorilor erorilor sistematice și aleatorii. O calibrare conform ISO 8655 trebuie efectuată o dată pe an.
3. Pipete cu deplasare pozitivă: Verificați dacă aveți în laborator o pipetă cu deplasare pozitivă cu un interval de volum redus. În general, utilizarea acestui tip de pipetă duce la un rezultat mai bun la pipetare în ceea ce privește acuratețea și precizia decât în ​​cazul pipetelor clasice cu pernă de aer.
4. Încercați să utilizați volume mai mari: Puteți lua în considerare diluarea probei pentru a pipeta volume mai mari cu aceeași cantitate în reacția finală. Acest lucru poate reduce erorile de pipetare cu volume foarte mici de probă.

Pe lângă un instrument bun, cercetătorul trebuie să aibă o tehnică de pipetare foarte bună. Acordați o atenție deosebită următorilor pași:

1. Atașarea vârfului: Nu blocați pipeta pe vârf, deoarece acest lucru poate deteriora capătul fin al vârfului, poate duce la redirecționarea fasciculului de lichid sau poate deteriora orificiul. Aplicați doar o presiune ușoară atunci când atașați un vârf și utilizați o pipetă cu un con acționat de arc.
2. Ținerea pipetei: Nu țineți pipeta în mână în timp ce așteptați centrifuga, ciclorele etc. Interiorul pipetei se va încălzi și va duce la dilatarea pernei de aer, rezultând abateri de la volumul setat la pipetare.
3. Pre-umectare: Umidificarea aerului din interiorul vârfului și pipetei pregătește vârful pentru probă și evită evaporarea la aspirarea volumului de transfer.
4. Aspirație verticală: Acest lucru este foarte important atunci când se manipulează volume mici pentru a evita efectul de capilaritate care apare atunci când pipeta este ținută într-un unghi.
5. Adâncimea de imersie: Scufundați vârful cât mai puțin posibil pentru a preveni pătrunderea lichidului în vârf din cauza efectului de capilaritate. Regulă generală: Cu cât vârful și volumul sunt mai mici, cu atât adâncimea de imersie este mai mică. Recomandăm un maxim de 2 mm la pipetarea volumelor mici.
6. Dozare la un unghi de 45°: Curgerea optimă a lichidului este garantată atunci când pipeta este ținută la un unghi de 45°.
7. Contactul cu peretele vasului sau cu suprafața lichidului: Volumele mici pot fi dozate corect doar atunci când vârful este ținut pe peretele vasului sau scufundat în lichid. Chiar și ultima picătură de la vârf poate fi dozată cu precizie.
8. Purjare: O purjare este obligatorie după distribuirea unor volume mici pentru a distribui chiar și ultima picătură de lichid prezentă în vârf. Purjarea trebuie efectuată și pe peretele vasului. Aveți grijă să nu introduceți bule de aer în probă atunci când efectuați o purjare la suprafața lichidului.