Wéi ee kleng Volumen mat Handpipetten pipetteiert

Well de Fokus méi op d'Reduktioun vu Reagenzien a Käschten geluecht gëtt, si méi kleng Volumen héich gefrot, z.B. fir d'Virbereedung vu PCR Mastermix oder Enzymreaktiounen. Awer d'Pipetterei vu klenge Volumen vun 0,2 - 5 µL stellt nei Erausfuerderunge fir d'Genauegkeet a Präzisioun vun der Pipettéierung duer. Déi folgend Punkte si wesentlech:

1. Pipette- a Spëtzgréisst: Wielt ëmmer déi Pipette mat dem niddregsten méigleche Nominalvolumen an der klengster Spëtz, fir de Loftkissen sou kleng wéi méiglech ze halen. Beim Pipetteieren vun z.B. 1 µL, wielt eng 0,25 - 2,5 µL Pipette an déi passend Spëtz amplaz vun enger 1 - 10 µL Pipette.
2. Kalibrierung a Wartung: Et ass essentiell, datt Är Pipetten richteg kalibréiert a gewartet sinn. Kleng Upassungen a futti Deeler op enger Pipett féieren zu enger massiver Erhéijung vun de systemateschen a zoufällege Feelerwäerter. Eng Kalibrierung no ISO 8655 muss eemol am Joer duerchgefouert ginn.
3. Positiv Verdrängungspipetten: Kuckt no, ob Dir eng positiv Verdrängungspipette mat engem niddrege Volumenberäich an Ärem Laboratoire hutt. Am Allgemengen féiert d'Benotzung vun dëser Zort Pipettéierung zu engem bessere Pipettéierungsresultat a punkto Genauegkeet a Präzisioun wéi mat klassesche Loftkëssenpipetten.
4. Probéiert méi grouss Volumen ze benotzen: Dir kënnt iwwerleeën, Är Prouf ze verdënnen, fir méi grouss Volumen mat der selwechter Quantitéit an der leschter Reaktioun ze pipetten. Dëst kann Pipettéierungsfehler mat ganz klenge Proufvolumen reduzéieren.

Nieft engem gudden Tool muss de Fuerscher och eng ganz gutt Pipettéierungstechnik hunn. Passt besonnesch op déi folgend Schrëtt op:

1. Spëtzbefestigung: D'Pipette net op der Spëtzt festklemmen, well dëst kéint den Enn vun der feiner Spëtzt beschiedegen, wouduerch de Flëssegkeetsstral ëmgeleet gëtt oder d'Öffnung beschiedegt gëtt. Dréckt nëmme liicht beim Befestigen vun enger Spëtzt a benotzt eng Pipett mat engem federbelaaschte Spëtzekonus.
2. D'Pipette halen: Halt d'Pipette net an der Hand, während Dir op d'Zentrifuge, de Cycler usw. waart. D'Innere vun der Pipett wärd sech erhëtzen an de Loftkissen dehnt sech aus, wat zu Ofwäichunge vum agestallte Volumen beim Pipettéieren féiere kann.
3. Virbefeuchtung: D'Befeuchtung vun der Loft an der Spëtzt an der Pipett preparéiert d'Spëtzt fir d'Prouf a verhënnert Verdampfung beim Aspiréieren vum Transfervolumen.
4. Vertikal Aspiratioun: Dëst ass ganz wichteg beim Ëmgang mat klenge Volumen, fir de Kapilläreffekt ze vermeiden, deen entsteet, wann d'Pipette schréi gehale gëtt.
5. Tauchdéift: Taucht d'Spëtzt sou wéineg wéi méiglech an, fir ze verhënneren, datt Flëssegkeet wéinst dem Kapillareffekt an d'Spëtzt kënnt. Faustregel: Wat méi kleng d'Spëtzt an de Volumen, wat méi kleng d'Tauchdéift ass. Mir recommandéieren maximal 2 mm beim Pipettéiere vu klenge Volumen.
6. Doséierung am 45° Wénkel: En optimalen Ausfloss vun der Flëssegkeet ass garantéiert, wann d'Pipette an engem 45° Wénkel gehale gëtt.
7. Kontakt mat der Gefässwand oder der Flëssegkeetsuewerfläch: Kleng Quantitéite kënnen nëmme richteg doséiert ginn, wann d'Spëtzt géint d'Gefässwand gehale gëtt oder a Flëssegkeet gedaucht gëtt. Souguer den leschten Drëps vun der Spëtzt kann präzis doséiert ginn.
8. Ausblosen: E Blow-out ass obligatoresch nodeems kleng Quantitéiten ausgedeelt goufen, fir och nëmmen den leschten Drëps Flëssegkeet an der Spëtzt auszeblosen. D'Ausblosen soll och géint d'Gefässwand duerchgefouert ginn. Passt op, datt keng Loftblosen an d'Prouf kommen, wann Dir e Blow-out op der Flëssegkeetsuewerfläch maacht.