როგორ გავწმინდოთ მცირე მოცულობები ხელის პიპეტებით

რადგან რეაგენტებისა და ხარჯების შემცირებაზე მეტი ყურადღება ექცევა, მცირე მოცულობებზე მოთხოვნა მაღალია, მაგალითად, PCR Mastermix-ის ან ფერმენტული რეაქციების მოსამზადებლად. თუმცა, 0.2-დან 5 µლ-მდე მცირე მოცულობების პიპეტირება პიპეტირების სიზუსტესა და სიზუსტეს ახალ გამოწვევებს უქმნის. მნიშვნელოვანია შემდეგი პუნქტები:

1. პიპეტისა და წვერის ზომა: ჰაერის ბალიშის მაქსიმალურად პატარა შესანარჩუნებლად ყოველთვის აირჩიეთ პიპეტი ყველაზე დაბალი ნომინალური მოცულობით და ყველაზე პატარა წვერით. მაგ. 1 µლ პიპეტის გამოყენებისას, 1-10 µლ პიპეტის ნაცვლად, აირჩიეთ 0.25 – 2.5 µლ პიპეტი შესაბამისი წვერით.
2. კალიბრაცია და მოვლა: აუცილებელია, რომ თქვენი პიპეტები სათანადოდ იყოს დაკალიბრებული და მოვლილი. პიპეტის მცირე კორექტირება და გატეხილი ნაწილები სისტემატური და შემთხვევითი შეცდომების მნიშვნელობების მასიურ ზრდას იწვევს. ISO 8655 სტანდარტის შესაბამისად კალიბრაცია წელიწადში ერთხელ უნდა განხორციელდეს.
3. დადებითი გადაადგილების პიპეტები: შეამოწმეთ, გაქვთ თუ არა თქვენს ლაბორატორიაში დაბალი მოცულობის დიაპაზონის დადებითი გადაადგილების პიპეტი. ზოგადად, ამ ტიპის პიპეტის გამოყენება სიზუსტისა და ზუსტობის თვალსაზრისით უკეთეს პიპეტირებას იძლევა, ვიდრე კლასიკური ჰაერის ბალიშისებრი პიპეტები.
4. ეცადეთ გამოიყენოთ უფრო დიდი მოცულობები: შეგიძლიათ განიხილოთ ნიმუშის განზავება, რათა საბოლოო რეაქციაში იგივე რაოდენობით უფრო დიდი მოცულობები პიპეტით ამოიღოთ. ამან შეიძლება შეამციროს პიპეტირების შეცდომები ძალიან მცირე მოცულობების შემთხვევაში.

კარგი ინსტრუმენტის გარდა, მკვლევარს ძალიან კარგი პიპეტირების ტექნიკა უნდა ჰქონდეს. განსაკუთრებული ყურადღება მიაქციეთ შემდეგ ნაბიჯებს:

1. წვერის მიმაგრება: არ გაჭედოთ პიპეტი წვერზე, რადგან ამან შეიძლება დააზიანოს წვრილი წვერის ბოლო, გამოიწვიოს სითხის ნაკადის გადამისამართება ან ხვრელის დაზიანება. წვერის მიმაგრებისას მხოლოდ მსუბუქი წნევა მოახდინეთ და გამოიყენეთ პიპეტი ზამბარიანი წვერის კონუსით.
2. პიპეტის დაჭერა: ცენტრიფუგის, ციკლერის და ა.შ. მოლოდინის დროს პიპეტი ხელში არ დაიჭიროთ. პიპეტის შიდა ნაწილი გაცხელდება და ჰაერის ბალიში გაფართოვდება, რაც პიპეტირების დროს დაყენებული მოცულობიდან გადახრებს გამოიწვევს.
3. წინასწარი დასველება: წვეროსა და პიპეტის შიგნით ჰაერის დატენიანება ამზადებს წვერს ნიმუშისთვის და ხელს უშლის აორთქლებას გადასატანი მოცულობის ასპირაციის დროს.
4. ვერტიკალური ასპირაცია: ეს ძალიან მნიშვნელოვანია მცირე მოცულობის გამოყენებისას, რათა თავიდან იქნას აცილებული კაპილარული ეფექტი, რომელიც წარმოიქმნება პიპეტის კუთხით დაჭერისას.
5. ჩაძირვის სიღრმე: კაპილარული ეფექტის გამო, წვერი რაც შეიძლება ნაკლებად ჩაძირეთ, რათა თავიდან აიცილოთ მასში სითხის მოხვედრა. ზოგადი წესი: რაც უფრო პატარაა წვერი და მოცულობა, მით უფრო დაბალია ჩაძირვის სიღრმე. მცირე მოცულობის პიპეტირებისას რეკომენდებულია მაქსიმუმ 2 მმ.
6. 45°-იანი კუთხით გაცემა: სითხის ოპტიმალური გადინება გარანტირებულია, როდესაც პიპეტი 45°-იანი კუთხით არის დაჭერილი.
7. ჭურჭლის კედელთან ან სითხის ზედაპირთან შეხება: მცირე მოცულობების სწორად გამოყოფა შესაძლებელია მხოლოდ მაშინ, როდესაც წვერი ჭურჭლის კედელზეა მიმაგრებული ან სითხეშია ჩაძირული. წვერიდან ბოლო წვეთის ზუსტად გამოყოფაც კი შესაძლებელია.
8. გამოშვება: მცირე მოცულობის გამოყოფის შემდეგ, გამოშვება სავალდებულოა, რათა თავიში არსებული სითხის ბოლო წვეთიც კი გამოიყოს. გამოშვება ასევე უნდა განხორციელდეს ჭურჭლის კედელთან მიმართებაში. სითხის ზედაპირზე გამოყოფის შესრულებისას ფრთხილად იყავით, რომ ჰაერის ბუშტები ნიმუშში არ შეიყვანოთ.