Hvernig á að pípetta lítið magn með handpípettum

Þar sem meiri áhersla er lögð á að draga úr notkun hvarfefna og kostnaði, er mikil eftirspurn eftir minni magni, t.d. til að undirbúa PCR Mastermix eða ensímhvörf. En að pípetta lítið magn frá 0,2 – 5 µL setur nýjar áskoranir fyrir nákvæmni og nákvæmni pípettunar. Eftirfarandi atriði eru mikilvæg:

1. Stærð pípettu og oddis: Veljið alltaf pípettu með lægsta mögulega nafnrúmmáli og minnsta oddi til að halda loftpúðanum eins litlum og mögulegt er. Þegar pípetta er t.d. 1 µL skal velja 0,25 – 2,5 µL pípettu og samsvarandi oddi frekar en 1 – 10 µL pípettu.
2. Kvörðun og viðhald: Það er nauðsynlegt að pípetturnar séu rétt kvarðaðar og viðhaldið. Lítil stilling og bilaðir hlutar á pípettu leiða til mikillar aukningar á kerfisbundnum og handahófskenndum villugildum. Kvörðun samkvæmt ISO 8655 verður að framkvæma einu sinni á ári.
3. Jákvæð tilfærslupípetta: Athugaðu hvort þú eigir jákvæða tilfærslupípettu með lágt rúmmálssvið í rannsóknarstofunni þinni. Almennt séð leiðir notkun þessarar tegundar pípettu til betri pípettunarniðurstaðna hvað varðar nákvæmni og nákvæmni en með hefðbundnum loftpúðapípettum.
4. Reynið að nota stærra magn: Þið gætuð íhugað að þynna sýnið til að pípetta stærra magn með sama magni í lokaviðbrögðunum. Þetta getur dregið úr pípettunarvillum með mjög litlu sýnisrúmmáli.

Auk góðs verkfæris verður rannsakandinn að hafa mjög góða pípettunartækni. Gefðu eftirfarandi skrefum sérstakan gaum:

1. Festing á oddi: Ekki klemma pípettuna á oddinum þar sem það gæti skemmt fíngerða oddin, sem gæti leitt til þess að vökvageislinn beindist aftur eða skemmt opið. Þrýstið aðeins létt þegar oddur er festur og notið pípettu með fjaðurspenntri keilu.
2. Að halda á pípettunni: Ekki halda á pípettunni á meðan þú bíður eftir skilvindu, hreyfibúnaði o.s.frv. Innra byrði pípettunnar mun hitna og loftpúðinn þenst út sem leiðir til frávika frá stilltu rúmmáli við pípetteringu.
3. Forvæta: Rakagjöf loftsins inni í oddinum og pípettunni undirbýr oddin fyrir sýnið og kemur í veg fyrir uppgufun þegar flutningsrúmmálið er sogað upp.
4. Lóðrétt sog: Þetta er mjög mikilvægt þegar meðhöndluð eru lítil rúmmál til að forðast háræðaráhrif sem verða þegar pípettan er haldin á ská.
5. Dýpt í pípettu: Dýfið oddinum eins lítið og mögulegt er til að koma í veg fyrir að vökvi komist inn í hann vegna háræðaráhrifa. Þumalputtaregla: Því minni sem oddurinn og rúmmálið er, því minni er dýptin. Við mælum með hámarki 2 mm þegar lítið magn er pipettað.
6. Dreifing í 45° horni: Bestur flæði vökvans er tryggður þegar pípettan er haldin í 45° horni.
7. Snerting við vegg æðar eða vökvayfirborð: Lítið magn er aðeins hægt að gefa rétt þegar stúturinn er haldinn upp að vegg æðar eða dýftur í vökva. Jafnvel síðasti dropinn af stútnum er hægt að gefa nákvæmlega.
8. Útblástur: Nauðsynlegt er að blása út eftir að lítið magn hefur verið gefið út til að losa jafnvel síðasta dropann af vökvanum sem er eftir í oddinum. Útblástur ætti einnig að framkvæma við vegg ílátsins. Gætið þess að loftbólur komist ekki inn í sýnið þegar útblástur er framkvæmdur við vökvayfirborðið.