Como pipetear pequenos volumes con pipetas manuais de man

A medida que se está a poñer máis énfase na redución de reactivos e custos, os volumes máis pequenos teñen unha gran demanda, por exemplo, para a preparación de PCR Mastermix ou reaccións encimáticas. Pero pipetear pequenos volumes de 0,2 a 5 µL supón novos desafíos para a precisión e a precisión do pipeteado. Os seguintes puntos son esenciais:

1. Tamaño da pipeta e da punta: Escolla sempre a pipeta co menor volume nominal posible e a punta máis pequena para manter o colchón de aire o máis pequeno posible. Ao pipetear 1 µL, por exemplo, escolla unha pipeta de 0,25 a 2,5 µL e a punta correspondente en lugar dunha pipeta de 1 a 10 µL.
2. Calibración e mantemento: É fundamental que as pipetas estean calibradas e manteñas correctamente. Os pequenos axustes e as pezas rotas nunha pipeta provocan un aumento masivo dos valores de erro sistemático e aleatorio. Débese realizar unha calibración segundo a norma ISO 8655 unha vez ao ano.
3. Pipetas de desprazamento positivo: comproba se tes unha pipeta de desprazamento positivo cun rango de volume baixo no teu laboratorio. En xeral, o uso deste tipo de pipeta leva a un mellor resultado de pipetado en termos de precisión e precisión que coas pipetas clásicas de colchón de aire.
4. Tenta usar volumes maiores: Podes considerar diluír a mostra para pipetear volumes maiores coa mesma cantidade na reacción final. Isto pode reducir os erros de pipeteo con volumes de mostra moi pequenos.

Ademais dunha boa ferramenta, o investigador debe ter unha moi boa técnica de pipeteado. Preste especial atención aos seguintes pasos:

1. Colocación da punta: Non enganche a pipeta na punta, xa que isto pode danar o extremo fino da punta, provocar que o feixe de líquido se redirixa ou danar o orificio. Aplique só unha presión lixeira ao colocar unha punta e use unha pipeta cun cono de punta accionado por resorte.
2. Suxeitando a pipeta: Non suxeite a pipeta na man mentres agarda a centrífuga, o termociclador, etc. O interior da pipeta quentarase e fará que o colchón de aire se expanda, o que provocará desviacións do volume axustado ao pipetear.
3. Prehumidificación: a humidificación do aire dentro da punta e da pipeta prepara a punta para a mostra e evita a evaporación ao aspirar o volume de transferencia.
4. Aspiración vertical: Isto é moi importante cando se manipulan volumes pequenos para evitar o efecto capilar que se produce cando se sostén a pipeta en ángulo.
5. Profundidade de inmersión: Mergulle a punta o mínimo posible para evitar que entre líquido nela debido ao efecto capilar. Regra xeral: canto menor sexa a punta e o volume, menor será a profundidade de inmersión. Recomendamos un máximo de 2 mm ao pipetear volumes pequenos.
6. Dispensación a un ángulo de 45°: O fluxo óptimo do líquido está garantido cando a pipeta se sostén a un ángulo de 45°.
7. Contacto coa parede do recipiente ou coa superficie do líquido: Os volumes pequenos só se poden dispensar correctamente cando a punta se sostén contra a parede do recipiente ou se mergulla no líquido. Mesmo a última pinga da punta pódese dispensar con precisión.
8. Soprado: É obrigatorio realizar un soprado despois de dispensar pequenos volumes para dispensar mesmo a última pinga de líquido presente na punta. O soprado tamén debe realizarse contra a parede do recipiente. Teña coidado de non introducir burbullas de aire na mostra ao realizar un soprado na superficie do líquido.