Lors du pipetage de volumes de 0,2 à 5 µL, la précision et l'exactitude du pipetage sont de la plus haute importance. Une bonne technique de pipetage est essentielle car les erreurs de manipulation sont plus évidentes avec de petits volumes.
L'accent étant mis sur la réduction des réactifs et des coûts, les petits volumes sont très demandés, par exemple pour la préparation de Mastermix PCR ou de réactions enzymatiques. Cependant, le pipetage de petits volumes, de 0,2 à 5 µL, pose de nouveaux défis en termes de précision et d'exactitude. Les points suivants sont essentiels :
- Taille de la pipette et de l'embout : Choisissez toujours la pipette ayant le plus petit volume nominal possible et l'embout le plus petit afin de minimiser le coussin d'air. Pour pipeter 1 µL, par exemple, choisissez une pipette de 0,25 à 2,5 µL et l'embout correspondant plutôt qu'une pipette de 1 à 10 µL.
- Étalonnage et entretien : Il est essentiel que vos pipettes soient correctement étalonnées et entretenues. De petits ajustements et des pièces cassées sur une pipette entraînent une augmentation considérable des valeurs d'erreur systématique et aléatoire. Un étalonnage selon la norme ISO 8655 doit être effectué une fois par an.
- Pipettes à déplacement positif : Vérifiez si votre laboratoire possède une pipette à déplacement positif à faible volume. En général, l'utilisation de ce type de pipette permet d'obtenir de meilleurs résultats de pipetage en termes d'exactitude et de précision qu'avec les pipettes à coussin d'air classiques.
- Essayez d'utiliser des volumes plus importants : vous pouvez diluer votre échantillon pour pipeter des volumes plus importants avec la même quantité dans la réaction finale. Cela peut réduire les erreurs de pipetage avec de très petits volumes d'échantillon.
Outre un bon outil, le chercheur doit maîtriser une excellente technique de pipetage. Portez une attention particulière aux étapes suivantes :
- Fixation de l'embout : Ne pas coincer la pipette sur l'embout, car cela pourrait endommager l'extrémité fine de l'embout, dévier le jet de liquide ou endommager l'orifice. N'exercer qu'une légère pression lors de la fixation de l'embout et utiliser une pipette munie d'un cône à ressort.
- Tenue de la pipette : Ne tenez pas la pipette dans votre main en attendant la centrifugeuse, le cycleur, etc. L'intérieur de la pipette va chauffer et entraîner l'expansion du coussin d'air, ce qui entraînera des écarts par rapport au volume réglé lors du pipetage.
- Pré-mouillage : L'humidification de l'air à l'intérieur de la pointe et de la pipette prépare la pointe à l'échantillon et évite l'évaporation lors de l'aspiration du volume de transfert.
- Aspiration verticale : Ceci est très important lors de la manipulation de petits volumes pour éviter l'effet capillaire qui se produit lorsque la pipette est maintenue à un angle.
- Profondeur d'immersion : Immerger la pointe le moins possible afin d'éviter toute pénétration de liquide par capillarité. Règle générale : plus la pointe et le volume sont petits, plus la profondeur d'immersion est faible. Nous recommandons un maximum de 2 mm pour le pipetage de petits volumes.
- Distribution à un angle de 45° : Un écoulement optimal du liquide est garanti lorsque la pipette est maintenue à un angle de 45°.
- Contact avec la paroi du récipient ou la surface du liquide : De petits volumes ne peuvent être correctement distribués que lorsque la pointe est maintenue contre la paroi du récipient ou immergée dans le liquide. Même la dernière goutte de la pointe peut être distribuée avec précision.
- Soufflage : Un soufflage est obligatoire après la distribution de faibles volumes afin de libérer la dernière goutte de liquide présente dans la pointe. Le soufflage doit également être effectué contre la paroi du récipient. Veillez à ne pas introduire de bulles d'air dans l'échantillon lors du soufflage à la surface du liquide.
Date de publication : 18 février 2021