Nola pipetatu bolumen txikiak eskuzko pipetekin

Erreaktiboak eta kostuak murrizteari arreta handiagoa jartzen zaionez, bolumen txikiagoak oso eskatuak dira, adibidez, PCR Mastermix edo entzima erreakzioak prestatzeko. Baina 0,2 eta 5 µL arteko bolumen txikiak pipeteatzeak erronka berriak ezartzen ditu pipeteatzearen zehaztasunerako eta doitasunerako. Puntu hauek ezinbestekoak dira:

1. Pipeta eta puntaren tamaina: Aukeratu beti bolumen nominal txikiena duen pipeta eta punta txikiena, aire-kuxina ahalik eta txikiena izan dadin. 1 µL pipetatzerakoan, adibidez, aukeratu 0,25 – 2,5 µL-ko pipeta bat eta punta egokia, 1 – 10 µL-ko pipeta baten ordez.
2. Kalibrazioa eta mantentze-lanak: Ezinbestekoa da pipetak behar bezala kalibratzea eta mantentzea. Pipeta batean doikuntza txikiek eta hautsitako piezen ondorioz errore sistematiko eta ausazkoen balioen igoera handia dago. ISO 8655 arauaren araberako kalibrazioa urtean behin egin behar da.
3. Pipeta desplazamendu positiboak: Egiaztatu ea zure laborategian bolumen-tarte baxuko pipeta desplazamendu positiboa baduzuen. Oro har, pipeta mota hau erabiltzeak emaitza hobeak ematen ditu zehaztasunari eta doitasunari dagokionez, aire-kuxindun pipeta klasikoekin alderatuta.
4. Saiatu bolumen handiagoak erabiltzen: Lagina diluitu dezakezu azken erreakzioan kantitate berdinarekin bolumen handiagoak pipetatzeko. Horrek pipetatze-erroreak murriztu ditzake lagin-bolumen oso txikiekin.

Tresna ona izateaz gain, ikertzaileak pipetatzeko teknika oso ona izan behar du. Jarri arreta berezia hurrengo urratsei:

1. Puntaren eranskina: Ez sartu pipeta puntan, horrek punta fina kaltetu baitezake, likido-izpia birbideratu edo zuloa kaltetu. Punta eranstean, presio arina egin eta malguki-konoa duen pipeta erabili.
2. Pipeta eustea: Ez eutsi pipeta eskuan zentrifugatzailea, ziklatzailea edo antzekoak zain dauden bitartean. Pipetaren barrualdea berotu egingo da eta aire-kuxina zabaldu egingo da, eta ondorioz, ezarritako bolumenetik desbideratzeak eragingo dira pipetatzean.
3. Aurrez bustitzea: Puntaren eta pipetaren barruko airearen hezetzeak punta laginarentzat prestatzen du eta transferentzia-bolumena xurgatzen denean lurruntzea saihesten du.
4. Aspirazio bertikala: Oso garrantzitsua da bolumen txikiak maneiatzen direnean, pipeta angelu batean eusten denean gertatzen den kapilaritate efektua saihesteko.
5. Murgiltze-sakonera: Murgildu punta ahalik eta gutxien, likidoa kapilaritate-efektuaren ondorioz puntan sartzea saihesteko. Araua: Punta eta bolumena zenbat eta txikiagoa izan, orduan eta murgiltze-sakonera txikiagoa. Bolumen txikiak pipetatzean gehienez 2 mm gomendatzen dugu.
6. 45°-ko angeluan banatzea: Likidoaren irteera optimoa bermatuta dago pipeta 45°-ko angeluan eusten denean.
7. Ontziaren hormarekiko edo likidoaren gainazalarekiko kontaktua: Bolumen txikiak behar bezala banatu daitezke punta ontziaren hormaren kontra eusten denean edo likidoan murgilduta dagoenean bakarrik. Puntatik ateratzen den azken tanta ere zehaztasunez banatu daiteke.
8. Putz egitea: Bolumen txikiak eman ondoren, putz egitea derrigorrezkoa da puntan dagoen likido tanta azkena ere botatzeko. Putz egitea ontziaren hormaren kontra egin behar da. Kontuz ibili aire burbuilak laginera ez sartzeko likidoaren gainazalean putz egitean.