Al pipetear volúmenes de 0,2 a 5 µL, la precisión y exactitud del pipeteo son de suma importancia; una buena técnica de pipeteo es esencial porque los errores de manipulación son más obvios con volúmenes pequeños.
A medida que se prioriza la reducción de reactivos y costos, aumenta la demanda de volúmenes más pequeños, por ejemplo, para la preparación de mezclas maestras para PCR o reacciones enzimáticas. Sin embargo, pipetear volúmenes pequeños de 0,2 a 5 µL plantea nuevos desafíos para la precisión y exactitud del pipeteo. Los siguientes puntos son esenciales:
- Tamaño de la pipeta y la punta: Elija siempre la pipeta con el menor volumen nominal posible y la punta más pequeña para minimizar el volumen de aire. Al pipetear 1 µL, por ejemplo, elija una pipeta de 0,25 a 2,5 µL y la punta correspondiente en lugar de una de 1 a 10 µL.
- Calibración y mantenimiento: Es fundamental calibrar y mantener correctamente sus pipetas. Pequeños ajustes y piezas rotas en una pipeta provocan un aumento considerable de los valores de error sistemático y aleatorio. Se debe realizar una calibración anual según la norma ISO 8655.
- Pipetas de desplazamiento positivo: Compruebe si dispone de una pipeta de desplazamiento positivo con un rango de volumen bajo en su laboratorio. En general, el uso de este tipo de pipeta ofrece mejores resultados de pipeteo en cuanto a exactitud y precisión que con las pipetas clásicas de cámara de aire.
- Intente usar volúmenes mayores: Puede considerar diluir la muestra para pipetear volúmenes mayores con la misma cantidad en la reacción final. Esto puede reducir los errores de pipeteo con volúmenes de muestra muy pequeños.
Además de una buena herramienta, el investigador debe poseer una excelente técnica de pipeteo. Preste especial atención a los siguientes pasos:
- Fijación de la punta: No presione la pipeta contra la punta, ya que podría dañar el extremo fino y provocar que el chorro de líquido se desvíe o dañar el orificio. Aplique solo una ligera presión al fijar la punta y utilice una pipeta con cono de punta con resorte.
- Sujeción de la pipeta: No sujete la pipeta en la mano mientras espera la centrífuga, el ciclador, etc. El interior de la pipeta se calentará y hará que el colchón de aire se expanda, lo que provocará desviaciones del volumen establecido al pipetear.
- Prehumectación: La humidificación del aire dentro de la punta y la pipeta prepara la punta para la muestra y evita la evaporación al aspirar el volumen de transferencia.
- Aspiración vertical: Esto es muy importante cuando se manipulan volúmenes pequeños para evitar el efecto capilar que se produce cuando se sostiene la pipeta en ángulo.
- Profundidad de inmersión: Sumerja la punta lo mínimo posible para evitar que entre líquido por capilaridad. Regla general: Cuanto menor sea la punta y el volumen, menor será la profundidad de inmersión. Recomendamos un máximo de 2 mm al pipetear volúmenes pequeños.
- Dispensación en un ángulo de 45°: Se garantiza un flujo de salida óptimo del líquido cuando la pipeta se mantiene en un ángulo de 45°.
- Contacto con la pared del recipiente o la superficie del líquido: Los volúmenes pequeños solo se dispensan correctamente cuando la punta se mantiene contra la pared del recipiente o se sumerge en el líquido. Incluso la última gota de la punta se dispensa con precisión.
- Soplado: Es obligatorio soplar después de dispensar volúmenes bajos para dispensar hasta la última gota de líquido presente en la punta. El soplado también debe realizarse contra la pared del recipiente. Tenga cuidado de no introducir burbujas de aire en la muestra al soplar en la superficie del líquido.
Hora de publicación: 18 de febrero de 2021