Kiel Pipeti Malgrandajn Volumojn per Manaj Manaj Pipetoj

Ĉar pli da fokuso estas metata sur reduktadon de reakciiloj kaj kostoj, pli malgrandaj volumoj estas tre postulataj, ekzemple, por la preparado de PCR Mastermix aŭ enzimaj reakcioj. Sed pipeti malgrandajn volumojn de 0,2 ĝis 5 µL starigas novajn defiojn por pipeta precizeco kaj precizeco. La jenaj punktoj estas esencaj:

1. Pipeto kaj pintograndeco: Ĉiam elektu la pipeton kun la plej malgranda nominala volumeno ebla kaj la plej malgrandan pinton por teni la aerkusenon kiel eble plej malgranda. Kiam vi pipetas 1 µL, ekz. elektu pipeton de 0,25–2,5 µL kaj kongruan pinton anstataŭ pipeton de 1–10 µL.
2. Kalibrado kaj prizorgado: Estas esence, ke viaj pipetoj estu ĝuste kalibritaj kaj prizorgataj. Malgrandaj alĝustigoj kaj rompitaj partoj sur pipeto kondukas al grandega pliiĝo de sistemaj kaj hazardaj erarvaloroj. Kalibrado laŭ ISO 8655 devas esti farita unufoje jare.
3. Pipetoj kun pozitiva delokiĝo: Kontrolu ĉu vi havas en via laboratorio pozitivan delokiĝan pipeton kun malalta volumena gamo. Ĝenerale, uzi ĉi tiun tipon de pipeto kondukas al pli bona pipeta rezulto rilate al precizeco kaj precizeco ol per klasikaj aerkusenaj pipetoj.
4. Provu uzi pli grandajn volumojn: Vi povus konsideri diluigi vian specimenon por pipeti pli grandajn volumojn kun la sama kvanto en la fina reakcio. Tio povas redukti pipetajn erarojn kun tre malgrandaj specimenvolumoj.

Aldone al bona ilo, la esploristo devas havi tre bonan pipetadteknikon. Atentu aparte la jenajn paŝojn:

1. Aldonaĵo de la pinto: Ne puŝu la pipeton sur la pinton, ĉar tio povus difekti la fajnan pinton, kaŭzante redirekton de la likva fasko aŭ difekti la aperturon. Nur apliku malpezan premon dum aldonado de pinto kaj uzu pipeton kun risort-ŝarĝita pintokonuso.
2. Tenado de la pipeto: Ne tenu la pipeton en via mano dum vi atendas la centrifugilon, ciklilon, ktp. La interno de la pipeto varmiĝos kaj kaŭzos disetendiĝon de la aerkuseno, rezultante en devioj de la agordita volumeno dum pipetado.
3. Antaŭmalsekigo: La humidigo de la aero ene de la pinto kaj pipeto preparas la pinton por la specimeno kaj evitas vaporiĝon dum aspirado de la translokiga volumeno.
4. Vertikala aspirado: Ĉi tio estas tre grava kiam oni manipulas malgrandajn volumojn por eviti la kapilaran efikon, kiu okazas kiam la pipeto estas tenata laŭ angulo.
5. Mergprofundo: Mergu la pinton kiel eble plej malmulte por malhelpi, ke likvaĵo eniru la pinton pro la kapilara efiko. Ĝenerale: Ju pli malgranda la pinto kaj volumeno, des pli malgranda la mergprofundo. Ni rekomendas maksimumon de 2 mm kiam oni pipetas malgrandajn volumojn.
6. Disdonado laŭ 45° angulo: Optimuma elfluo de la likvaĵo estas garantiita kiam la pipeto estas tenata laŭ 45° angulo.
7. Kontakto al la ujo-muro aŭ likva surfaco: Malgrandaj volumoj povas esti ĝuste elmetitaj nur kiam la pinto estas tenata kontraŭ la ujo-muro, aŭ mergita en likvaĵon. Eĉ la lasta guto de la pinto povas esti elmetita precize.
8. Blovado: Blovado estas deviga post disdonado de malgrandaj volumoj por eligi eĉ la lastan guton da likvaĵo ĉeestanta en la pinto. La blovado ankaŭ devus esti farita kontraŭ la vaskvan muron. Atentu ne enporti aervezikojn en la specimenon dum blovado ĉe la likva surfaco.