Quan es pipetegen volums de 0,2 a 5 µL, la precisió i la precisió del pipeteig són de màxima importància. Una bona tècnica de pipeteig és essencial, ja que els errors de manipulació són més evidents amb volums petits.
A mesura que es posa més èmfasi en la reducció de reactius i costos, els volums més petits tenen una gran demanda, per exemple, per a la preparació de PCR Mastermix o reaccions enzimàtiques. Però pipetejar petits volums de 0,2 a 5 µL planteja nous reptes per a la precisió i la precisió del pipeteig. Els punts següents són essencials:
- Mida de la pipeta i la punta: Trieu sempre la pipeta amb el volum nominal més baix possible i la punta més petita per mantenir el coixí d'aire el més petit possible. Quan pipetegeu 1 µL, per exemple, trieu una pipeta de 0,25 a 2,5 µL i una punta adequada en lloc d'una pipeta d'1 a 10 µL.
- Calibratge i manteniment: És essencial que les pipetes estiguin calibrades i mantingudes correctament. Petits ajustaments i peces trencades en una pipeta provoquen un augment massiu dels valors d'error sistemàtic i aleatori. Cal realitzar un calibratge segons la norma ISO 8655 un cop l'any.
- Pipetes de desplaçament positiu: comproveu si teniu una pipeta de desplaçament positiu amb un rang de volum baix al vostre laboratori. En general, l'ús d'aquest tipus de pipeta condueix a un millor resultat de pipeteig en termes de precisió i precisió que amb les pipetes clàssiques de coixí d'aire.
- Intenta utilitzar volums més grans: Pots considerar diluir la mostra per pipetejar volums més grans amb la mateixa quantitat a la reacció final. Això pot reduir els errors de pipeteig amb volums de mostra molt petits.
A més d'una bona eina, l'investigador ha de tenir una molt bona tècnica de pipeteig. Presteu especial atenció als passos següents:
- Fixació de la punta: No enganxeu la pipeta a la punta, ja que això pot danyar l'extrem fi de la punta, fer que el feix de líquid es redirigeixi o danyar l'orifici. Només apliqueu una pressió lleugera quan fixeu una punta i utilitzeu una pipeta amb un con de punta accionat per ressort.
- Subjectar la pipeta: No subjecteu la pipeta a la mà mentre espereu que arribi la centrífuga, el ciclador, etc. L'interior de la pipeta s'escalfarà i farà que el coixí d'aire s'expandeixi, cosa que provocarà desviacions del volum establert en pipetejar.
- Prehumidificació: La humidificació de l'aire dins de la punta i la pipeta prepara la punta per a la mostra i evita l'evaporació en aspirar el volum de transferència.
- Aspiració vertical: Això és molt important quan es manipulen volums petits per evitar l'efecte capil·lar que es produeix quan la pipeta es manté en angle.
- Profunditat d'immersió: Submergiu la punta tan poc com sigui possible per evitar que hi entri líquid a causa de l'efecte capil·lar. Regla general: Com més petits siguin la punta i el volum, menor serà la profunditat d'immersió. Recomanem un màxim de 2 mm quan pipetegeu volums petits.
- Dosificació a un angle de 45°: El flux òptim del líquid està garantit quan la pipeta es manté a un angle de 45°.
- Contacte amb la paret del recipient o la superfície del líquid: Els volums petits només es poden dispensar correctament quan la punta es manté contra la paret del recipient o es submergeix en el líquid. Fins i tot l'última gota de la punta es pot dispensar amb precisió.
- Buit: Cal buidar la mostra després de dispensar volums baixos per dispensar fins i tot l'última gota de líquid present a la punta. El buit també s'ha de dur a terme contra la paret del recipient. Aneu amb compte de no introduir bombolles d'aire a la mostra quan feu un buit a la superfície del líquid.
Data de publicació: 18 de febrer de 2021