Kako pipetirati male količine ručnim pipetama

Kako se sve više pažnje posvećuje smanjenju reagensa i troškova, manje količine su veoma tražene, npr. za pripremu PCR Mastermixa ili enzimskih reakcija. Međutim, pipetiranje malih količina od 0,2 – 5 µL postavlja nove izazove za tačnost i preciznost pipetiranja. Sljedeće tačke su ključne:

1. Veličina pipete i vrha: Uvijek birajte pipetu s najmanjim mogućim nominalnim volumenom i najmanjim vrhom kako biste što više smanjili zračni jastuk. Prilikom pipetiranja npr. 1 µL, odaberite pipetu od 0,25 – 2,5 µL i odgovarajući vrh, umjesto pipete od 1 – 10 µL.
2. Kalibracija i održavanje: Neophodno je da su vaše pipete pravilno kalibrirane i održavane. Mala podešavanja i slomljeni dijelovi na pipeti dovode do masovnog povećanja sistematskih i slučajnih grešaka. Kalibracija prema ISO 8655 mora se obavljati jednom godišnje.
3. Pipete s pozitivnim istiskivanjem: Provjerite imate li u svojoj laboratoriji pipetu s pozitivnim istiskivanjem i malim rasponom volumena. Općenito, korištenje ove vrste pipete dovodi do boljih rezultata pipetiranja u smislu tačnosti i preciznosti nego s klasičnim pipetama sa zračnim jastukom.
4. Pokušajte koristiti veće volumene: Možete razmotriti razrjeđivanje uzorka kako biste pipetirali veće volumene s istom količinom u konačnoj reakciji. Ovo može smanjiti greške pipetiranja s vrlo malim volumenima uzoraka.

Pored dobrog alata, istraživač mora imati i vrlo dobru tehniku ​​pipetiranja. Obratite posebnu pažnju na sljedeće korake:

1. Pričvršćivanje vrha: Nemojte pritiskati pipetu na vrh jer to može oštetiti fini vrh, uzrokovati preusmjeravanje mlaza tekućine ili oštetiti otvor. Prilikom pričvršćivanja vrha upotrijebite samo lagani pritisak i koristite pipetu s opružnim konusnim vrhom.
2. Držanje pipete: Ne držite pipetu u ruci dok čekate centrifugu, cikler itd. Unutrašnjost pipete će se zagrijati i uzrokovati širenje zračnog jastuka, što će rezultirati odstupanjima od postavljene zapremine prilikom pipetiranja.
3. Prethodno vlaženje: Vlaženje zraka unutar vrha i pipete priprema vrh za uzorak i sprječava isparavanje prilikom aspiracije prenesenog volumena.
4. Vertikalna aspiracija: Ovo je veoma važno pri rukovanju malim količinama kako bi se izbjegao kapilarni efekat koji se javlja kada se pipeta drži pod uglom.
5. Dubina uranjanja: Uronite vrh što je manje moguće kako biste spriječili ulazak tekućine u vrh zbog kapilarnog efekta. Pravilo: Što je manji vrh i volumen, to je manja dubina uranjanja. Preporučujemo maksimalno 2 mm pri pipetiranju malih volumena.
6. Doziranje pod uglom od 45°: Optimalno isticanje tečnosti je zagarantovano kada se pipeta drži pod uglom od 45°.
7. Kontakt sa zidom posude ili površinom tečnosti: Male količine se mogu pravilno dozirati samo kada se vrh drži uz zid posude ili uroni u tečnost. Čak se i posljednja kap sa vrha može precizno dozirati.
8. Ispuhivanje: Ispuhivanje je obavezno nakon ispuštanja malih količina kako bi se istisnula i posljednja kap tekućine prisutna u vrhu. Ispuhivanje također treba izvršiti uz stijenku posude. Pazite da ne unesete mjehuriće zraka u uzorak kada izvodite ispuhivanje na površini tekućine.