Hoe om klein volumes met handmatige pipette te pipetteer

Aangesien meer fokus op die vermindering van reagense en koste geplaas word, is kleiner volumes in hoë aanvraag, bv. vir die voorbereiding van PCR Mastermix of ensiemreaksies. Maar die pipettering van klein volumes van 0.2 – 5 µL stel nuwe uitdagings vir pipetteringsakkuraatheid en presisie. Die volgende punte is noodsaaklik:

1. Pipet- en puntgrootte: Kies altyd die pipet met die laagste nominale volume moontlik en die kleinste punt om die lugkussing so klein as moontlik te hou. Wanneer jy bv. 1 µL pipetteer, kies 'n 0.25 – 2.5 µL pipet en bypassende punt eerder as 'n 1 – 10 µL pipet.
2. Kalibrasie en onderhoud: Dit is noodsaaklik dat u pipette behoorlik gekalibreer en onderhou word. Klein aanpassings en gebreekte onderdele op 'n pipet lei tot 'n massiewe toename in sistematiese en ewekansige foutwaardes. 'n Kalibrasie volgens ISO 8655 moet een keer per jaar uitgevoer word.
3. Positiewe verplasingspipette: Kontroleer of jy 'n positiewe verplasingspipet met 'n lae volumebereik in jou laboratorium het. Oor die algemeen lei die gebruik van hierdie tipe pipet tot 'n beter pipetteringsresultaat in terme van akkuraatheid en presisie as met klassieke lugkussingpipette.
4. Probeer om groter volumes te gebruik: Jy kan oorweeg om jou monster te verdun om groter volumes met dieselfde hoeveelheid in die finale reaksie te pipetteer. Dit kan pipetteerfoute met baie klein monstervolumes verminder.

Benewens 'n goeie gereedskap, moet die navorser 'n baie goeie pipettegniek hê. Gee spesiale aandag aan die volgende stappe:

1. Puntbevestiging: Moenie die pipet teen die punt vasdruk nie, aangesien dit die fyn punt-ent kan beskadig, wat veroorsaak dat die vloeistofstraal herlei word of die opening beskadig. Wend slegs ligte druk aan wanneer 'n punt vasgemaak word en gebruik 'n pipet met 'n veerbelaaide puntkeël.
2. Vashou van die pipet: Moenie die pipet in jou hand hou terwyl jy wag vir die sentrifuge, sikleerder, ens. Die binnekant van die pipet sal verhit word en die lugkussing laat uitsit, wat afwykings van die ingestelde volume tydens pipettering tot gevolg sal hê.
3. Voorbenatting: Die bevogtiging van die lug binne die punt en pipet berei die punt voor vir die monster en vermy verdamping wanneer die oordragvolume opgesuig word.
4. Vertikale aspirasie: Dit is baie belangrik wanneer klein volumes hanteer word om die kapillêre effek te vermy wat voorkom wanneer die pipet teen 'n hoek gehou word.
5. Onderdompeldiepte: Dompel die punt so min as moontlik om te verhoed dat vloeistof die punt binnedring as gevolg van die kapillêre effek. Vuistreël: Hoe kleiner die punt en volume, hoe laer die onderdompeldiepte. Ons beveel 'n maksimum van 2 mm aan wanneer klein volumes gepipetter word.
6. Dosering teen 'n hoek van 45°: Optimale uitvloei van die vloeistof word gewaarborg wanneer die pipet teen 'n hoek van 45° gehou word.
7. Kontak met die vaatwand of vloeistofoppervlak: Klein volumes kan slegs behoorlik toegedien word wanneer die punt teen die vaatwand gehou word, of in vloeistof gedompel word. Selfs die laaste druppel van die punt kan akkuraat toegedien word.
8. Uitblaas: 'n Uitblaas is verpligtend na die toediening van lae volumes om selfs die laaste druppel vloeistof in die punt te dispenseer. Die uitblaas moet ook teen die wand van die houer uitgevoer word. Wees versigtig om nie lugborrels in die monster te bring wanneer 'n uitblaas by die vloeistofoppervlak uitgevoer word nie.