Uvod
PCR plošče, ki je že vrsto let stalnica v laboratoriju, postaja v sodobnem okolju še bolj razširjena, saj laboratoriji povečujejo svojo zmogljivost in vse bolj uporabljajo avtomatizacijo v svojih delovnih procesih. Doseganje teh ciljev ob hkratnem ohranjanju natančnosti in integritete poskusov je lahko težavno. Eno od pogostih področij, kjer se lahko prikradejo napake, je pri tesnjenjuPCR plošče, s slabo tehniko, ki omogoča izhlapevanje vzorcev, spreminja pH in s tem moti encimske funkcije ter spodbuja kontaminacijo. Učenje, kako zapretiPCR ploščapravilno odpravi ta tveganja in zagotovi ponovljive rezultate.
Poiščite pravi pečat za svojo PCR ploščo
Pokrovčki plošč v primerjavi s folijskimi tesnili v primerjavi s pokrovčki
KapiceSo dober način za tesno zapiranje krožnika, hkrati pa vam omogočajo, da krožnik po potrebi zelo enostavno odprete in ponovno zaprete brez odpadkov. Vendar pa imajo pokrovčki nekaj ključnih pomanjkljivosti.
Najprej boste morali kupiti poseben pokrovček, ki je združljiv, zaradi česar niso vsestranski. Prepričati se boste morali, da se izbrani pokrovček prilega plošči, kar je odvisno od proizvajalca, in izbrati kupolasto ali ravno obliko glede na termocikler, ki ga uporabljate.
Drugič, nameščanje pokrovčkov na ploščo je lahko zelo ponavljajoče in dolgočasno, saj obstaja tveganje navzkrižne kontaminacije, če na napačno vdolbinico namestite napačen pokrovček.
Čeprav so folijski tesnilni materiali manj prilagodljivi pri odstranjevanju in zamenjavi, so zelo vsestranski, saj ustrezajo kateri koli vrsti PCR plošče, ne glede na proizvajalca. Preprosto jih je mogoče razrezati na velikost, zaradi česar so zelo učinkoviti.
Druga možnost je ploščat pokrov. Ta ponuja manj zaščite kot pokrovčki in tesnila ter se uporablja predvsem za kratkotrajno pokrivanje, da se prepreči kontaminacija.
Optična tesnila v primerjavi s folijskimi tesnili
Ne glede na to, ali potrebujete optično, prozorno tesnilo alialuminijasta folijaZapečatiti ploščo je odvisno od vašega eksperimentalnega formata.Optične tesnilne folijeso prozorne, da omogočajo opazovanje vzorcev, hkrati pa jih ščitijo in preprečujejo izhlapevanje. Posebej uporabne so tudi pri poskusih qPCR, ki vključujejo zelo natančne meritve fluorescence neposredno s plošče, v tem primeru boste potrebovali tesnilno folijo, ki filtrira čim manj fluorescence. Pomembno je zagotoviti, da ima tesnilo ali pokrovček, ki ga uporabljate, dovolj visoko stopnjo optične prozornosti, da se zagotovi natančnost odčitkov.
Folije so primerne za vse vzorce, ki so občutljivi na svetlobo ali jih je treba shranjevati pri temperaturi pod 80 °C. Zaradi tega večina vzorcev, namenjenih dolgotrajnemu shranjevanju, potrebuje folijo. Folije so tudi prebodljive, kar je uporabno za pregledovanje posameznih vdolbinic ali za prenos vzorcev z iglami. To se lahko izvede ročno ali kot del robotske platforme.
Upoštevajte tudi, da agresivne snovi, kot so kisline, baze ali topila, zahtevajo tesnilo, ki jim je odporno, v tem primeru je folijsko tesnilo verjetno bolj primerno.
Lepilna folija v primerjavi s toplotno tesnilno folijo
Lepilne folije za tesnjenjeso zelo preprosti in enostavni za uporabo. Vse, kar morate storiti, je, da uporabnik nanese tesnilo na ploščo in s preprostim aplikatorjem pritisne navzdol ter ustvari tesen tesnilni sloj.
Toplotno tesnjenje je naprednejše in zagotavlja dolgotrajnejše tesnjenje z manjšo stopnjo izhlapevanja v primerjavi s konvencionalnim lepilnim tesnjenjem. Ta možnost je primerna, če želite vzorce shranjevati dolgoročno, vendar to prinaša dodatne zahteve glede opreme za tesnjenje plošč.
Kako zatesniti PCR ploščo
Metoda tesnjenja plošč
Samolepilno
1. Prepričajte se, da delate na ravni in stabilni delovni površini
2. Odstranite folijo iz embalaže in odstranite zaščitno folijo
3. Previdno namestite tesnilo na ploščo in se prepričajte, da so vse vdolbinice pokrite.
4. Z aplikatorjem pritiskajte na ploščo. Začnite na enem koncu in se enakomerno pomikajte proti drugemu.
5. To ponovite večkrat
6. Z aplikatorjem prečešite zunanje vdolbinice, da se prepričate, da so tudi te pravilno zaprte.
Toplotna tesnila
Toplotna tesnila delujejo tako, da se film s pomočjo tesnilne naprave za plošče stopi na rob vsake vdolbinice. Za uporabo toplotnega tesnilne naprave glejte navodila proizvajalca opreme. Prepričajte se, da je proizvajalec, od katerega kupujete opremo, ugleden, saj je zelo pomembno, da je tesnilo pravilno, učinkovito in vodotesno.
Zgornji nasveti za tesnjenje plošč
a. Pri pritiskanju na tesnilo pritiskajte v vodoravni in navpični smeri, da zagotovite pravilno tesnjenje.
b. Vedno je dobra praksa, da opravite poskusno delovanje ne glede na to, kaj počnete, in to ni nič drugače pri tesnjenju plošč. Preden uporabite ploščo z vzorci, preizkusite s prazno ploščo.
c. Pri testiranju odstranite tesnilo in preverite, ali se je lepilo pravilno prilepilo, brez vrzeli. Vizualni prikaz tega je v prvem referenčnem dokumentu. Če plošče niste pravilno zatesnili, bodo po odstranitvi tesnila nastale vrzeli, kjer se lepilo ni popolnoma prilepilo na ploščo.
d. Za pošiljanje in transport vzorcev je morda koristno, da na folijski pečat nanesete plastični pečat za dodatno zaščito (zlasti pred prebadanjem).
e. Pri nameščanju folije vedno pazite, da ni nobenih izboklin ali gub – to bo povzročilo puščanje in izhlapevanje
Čas objave: 23. november 2022