Introduksjon
PCR-plater, en fast del av laboratoriet i mange år, blir enda mer utbredt i moderne miljøer ettersom laboratorier skalerer opp gjennomstrømningen og i økende grad bruker automatisering i arbeidsflytene sine. Det kan være vanskelig å oppnå disse målene samtidig som man bevarer nøyaktigheten og integriteten til eksperimentene. Et av de vanlige områdene der feil kan snike seg inn, er med forseglingen avPCR-plater, med dårlig teknikk som tillater fordamping av prøver, endrer pH-verdien og dermed forstyrrer enzymatiske funksjoner, og inviterer til kontaminering. Lære hvordan man forsegler enPCR-plateeliminerer disse risikoene på riktig måte og sikrer reproduserbare resultater.
Finn riktig tetning for PCR-platen din
Platehetter vs. filmtetninger vs. lokk
Capser en god måte å forsegle tallerkenen din tett på, samtidig som du har fleksibiliteten til å enkelt åpne og forsegle tallerkenen etter behov uten svinn. Korker har imidlertid et par viktige ulemper.
Først må du kjøpe den spesifikke hetten som er kompatibel, noe som gjør dem ikke allsidige. Du må sørge for at hetten du velger passer til platen, som avhenger av produsenten, og velge enten kuppelformet eller flat basert på termosykleren du bruker.
For det andre kan det være svært repetitivt og kjedelig å sette på platen hettene, med risiko for krysskontaminering hvis du setter feil hette på feil brønn.
Selv om filmforseglinger er mindre fleksible når det gjelder fjerning og utskifting, er de svært allsidige ettersom de passer til alle typer PCR-plater, uavhengig av produsenten. De kan enkelt kuttes til riktig størrelse, noe som gjør dem svært effektive.
Et annet alternativ er et platelokk. Disse gir mindre beskyttelse enn korker og tetninger, og brukes hovedsakelig bare til kortvarig tildekking for å forhindre forurensning.
Optiske vs. foliefilmforseglinger
Enten du trenger en optisk, klar forsegling eller enaluminiumsfoliefilmÅ forsegle tallerkenen din avgjøres av ditt eksperimentelle format.Optiske tetningsfilmerer gjennomsiktige slik at du kan observere prøver, samtidig som de beskyttes og forhindrer fordampning. De er også spesielt nyttige i qPCR-eksperimenter som innebærer å foreta svært presise målinger av fluorescens direkte fra platen. I så fall trenger du en forseglingsfilm som filtrerer ut så lite fluorescens som mulig. Det er viktig å sørge for at forseglingen eller korken du bruker har et høyt nok nivå av optisk klarhet til å sikre at avlesningene er nøyaktige.
Foliefilmer er passende for prøver som er lysfølsomme eller skal lagres ved under 80 °C. Av denne grunn vil de fleste prøver som er beregnet for langtidslagring kreve en foliefilm. Foliefilmer er også gjennomborbare, noe som er nyttig for enten å undersøke individuelle brønner eller for overføring av prøver med nåler. Dette kan gjøres manuelt eller som en del av en robotplattform.
Vær også oppmerksom på at aggressive stoffer som inkluderer syrer, baser eller løsemidler vil kreve en tetning som tåler dem, og i så fall er en folietetning sannsynligvis mer passende.
Lim vs. varmeforseglingsfilm
Selvklebende filmforseglingerer veldig enkle å påføre. Alt du trenger å gjøre er at brukeren påfører forseglingen på platen og bruker et enkelt applikatorverktøy til å presse ned og danne en tett forsegling.
Varmeforseglinger er mer avanserte og gir en mer holdbar forsegling med redusert fordampningshastighet sammenlignet med en konvensjonell klebeforsegling. Dette alternativet er passende hvis du ønsker å lagre prøver på lang sikt, selv om dette kommer med et tilleggskrav til plateforseglingsutstyr.
Slik forsegler du en PCR-plate
Plateforseglingsmetode
Selvklebende
1. Sørg for at du jobber på en flat og stabil arbeidsflate
2. Ta filmen ut av emballasjen og fjern baksiden
3. Plasser forseglingen forsiktig på platen, samtidig som du sørger for at alle brønnene er dekket.
4. Bruk et applikatorverktøy til å legge trykk over platen. Start fra den ene enden og arbeid deg over til den andre, og trykk jevnt.
5. Gjenta dette flere ganger
6. Kjør applikatoren rundt de ytre brønnene for å forsikre deg om at disse også er ordentlig forseglet.
Varmeforseglinger
Varmeforseglinger fungerer ved å smelte filmen til kanten av hver brønn ved hjelp av en plateforsegler. For å bruke en varmeforsegler, se instruksjonene fra produsenten av utstyret. Sørg for at produsenten du kjøper utstyret fra er anerkjent, da det er svært viktig at forseglingen er riktig, effektiv og vanntett.
Topptips for platetetting
a. Når du legger trykk på tetningen, må du gå i både horisontal og vertikal retning for å sikre god tetning.
b. Det er alltid god praksis å prøvekjøre det du gjør, og dette er ikke annerledes med platetetting. Test med en tom plate før du bruker en med prøver.
c. Når du tester, fjern forseglingen og kontroller at limet festet seg ordentlig, uten hull. Det finnes en visuell fremstilling av dette i det første referansedokumentet. Hvis du ikke har forseglet platen ordentlig, vil det være hull når du fjerner forseglingen der limet ikke har festet seg helt til platen.
d. Ved frakt og transport av prøver kan det være nyttig å bruke en plastforsegling oppå folieforseglingen for ekstra beskyttelse (spesielt mot hulltaking).
e. Sørg alltid for at det ikke er noen ujevnheter eller rynker når du påfører filmen – disse vil forårsake lekkasjer og fordampning
Publisert: 23. november 2022