Πώς να σφραγίσετε μια πλάκα PCR

Εισαγωγή

Πλάκες PCR, βασικό στοιχείο του εργαστηρίου εδώ και πολλά χρόνια, γίνονται ακόμη πιο διαδεδομένα στο σύγχρονο περιβάλλον, καθώς τα εργαστήρια αυξάνουν την παραγωγικότητά τους και χρησιμοποιούν όλο και περισσότερο αυτοματοποίηση στις ροές εργασίας τους. Η επίτευξη αυτών των στόχων, διατηρώντας παράλληλα την ακρίβεια και την ακεραιότητα των πειραμάτων, μπορεί να είναι δύσκολη. Ένας από τους συνηθισμένους τομείς όπου μπορούν να εμφανιστούν σφάλματα είναι η σφράγιση τωνΠλάκες PCR, με κακή τεχνική που επιτρέπει την εξάτμιση των δειγμάτων, αλλάζοντας το pH και επομένως διαταράσσοντας τις ενζυματικές λειτουργίες, και ευνοώντας τη μόλυνση. Μαθαίνοντας πώς να σφραγίζετε έναΠλάκα PCRεξαλείφει σωστά αυτούς τους κινδύνους και διασφαλίζει αναπαραγώγιμα αποτελέσματα.

Βρείτε τη σωστή σφράγιση για την πλάκα PCR σας

Καπάκια πλάκας έναντι στεγανοποιητικών μεμβράνης έναντι καπακιών
Καπέλααποτελούν έναν καλό τρόπο για να σφραγίσετε καλά την πλάκα σας, ενώ παράλληλα σας δίνουν την ευελιξία να την ξεσφραγίζετε και να την ξανασφραγίζετε πολύ εύκολα, όποτε χρειάζεται, χωρίς σπατάλη. Ωστόσο, τα καπάκια έχουν μερικά βασικά μειονεκτήματα.

Αρχικά, θα πρέπει να αγοράσετε το συγκεκριμένο συμβατό καπάκι, γεγονός που τα καθιστά μη ευέλικτα. Θα πρέπει να βεβαιωθείτε ότι το καπάκι που θα επιλέξετε ταιριάζει στην πλάκα, κάτι που εξαρτάται από τον κατασκευαστή του, και να επιλέξετε είτε θολωτό είτε επίπεδο ανάλογα με τον θερμοκυκλοποιητή που χρησιμοποιείτε.

Δεύτερον, η εφαρμογή των καπακιών στην πλάκα μπορεί να είναι πολύ επαναλαμβανόμενη και κουραστική, με κίνδυνο διασταυρούμενης μόλυνσης εάν τοποθετήσετε λάθος καπάκι σε λάθος φρεάτιο.

Ενώ οι σφραγίδες μεμβράνης είναι λιγότερο ευέλικτες όσον αφορά την αφαίρεση και την αντικατάσταση, είναι πολύ ευέλικτες, καθώς ταιριάζουν σε οποιονδήποτε τύπο πλάκας PCR, ανεξάρτητα από τον κατασκευαστή. Μπορούν απλώς να κοπούν στο κατάλληλο μέγεθος, γεγονός που τις καθιστά πολύ αποτελεσματικές.

Μια άλλη επιλογή είναι ένα καπάκι πιάτων. Αυτά προσφέρουν λιγότερη προστασία από τα καπάκια και τις σφραγίδες και χρησιμοποιούνται κυρίως μόνο για βραχυπρόθεσμη κάλυψη για την πρόληψη της μόλυνσης.

Οπτικές έναντι σφραγίδων μεμβράνης αλουμινίου

Είτε χρειάζεστε οπτική, διαφανή σφράγιση είτεμεμβράνη αλουμινίουΗ σφράγιση της πλάκας σας καθορίζεται από τη μορφή του πειράματός σας.Οπτικές μεμβράνες σφράγισηςείναι διαφανή για να σας επιτρέπουν να παρατηρείτε δείγματα, προστατεύοντάς τα παράλληλα και αποτρέποντας την εξάτμιση. Είναι επίσης ιδιαίτερα χρήσιμα σε πειράματα qPCR που περιλαμβάνουν την πραγματοποίηση εξαιρετικά ακριβών μετρήσεων φθορισμού απευθείας από την πλάκα, οπότε θα χρειαστείτε μια μεμβράνη στεγανοποίησης που φιλτράρει όσο το δυνατόν λιγότερο φθορισμό. Είναι σημαντικό να βεβαιωθείτε ότι η σφράγιση ή το καπάκι που χρησιμοποιείτε έχει αρκετά υψηλό επίπεδο οπτικής διαύγειας για να διασφαλίσετε ότι οι μετρήσεις είναι ακριβείς.

Οι μεμβράνες αλουμινίου είναι κατάλληλες για δείγματα που είναι ευαίσθητα στο φως ή πρόκειται να αποθηκευτούν σε θερμοκρασία κάτω των 80°C. Για αυτόν τον λόγο, τα περισσότερα δείγματα που προορίζονται για μακροχρόνια αποθήκευση απαιτούν μεμβράνη αλουμινίου. Οι μεμβράνες αλουμινίου είναι επίσης τρυπητές, κάτι που είναι χρήσιμο είτε για την εξέταση μεμονωμένων φρεατίων είτε για τη μεταφορά δειγμάτων με βελόνες. Αυτό μπορεί να γίνει χειροκίνητα ή ως μέρος μιας ρομποτικής πλατφόρμας.

Λάβετε επίσης υπόψη ότι οι επιθετικές ουσίες που περιλαμβάνουν οξέα, βάσεις ή διαλύτες θα απαιτούν στεγανοποίηση που να μπορεί να τις αντέξει, οπότε μια σφράγιση από αλουμινόχαρτο είναι πιθανώς καταλληλότερη.

Αυτοκόλλητη μεμβράνη έναντι μεμβράνης θερμικής σφράγισης
Σφραγίδες αυτοκόλλητης μεμβράνηςείναι πολύ απλά και εύκολα στην εφαρμογή. Το μόνο που χρειάζεται είναι ο χρήστης να εφαρμόσει τη σφράγιση στην πλάκα και να χρησιμοποιήσει ένα απλό εργαλείο εφαρμογής για να πιέσει προς τα κάτω και να σχηματίσει μια στεγανή σφράγιση.

Οι θερμοκολλήσεις είναι πιο προηγμένες, παρέχοντας μια σφράγιση μεγαλύτερης διάρκειας με μειωμένους ρυθμούς εξάτμισης σε σύγκριση με μια συμβατική αυτοκόλλητη σφράγιση. Αυτή η επιλογή είναι κατάλληλη εάν θέλετε να αποθηκεύσετε δείγματα μακροπρόθεσμα, αν και αυτό συνοδεύεται από μια πρόσθετη απαίτηση για εξοπλισμό σφράγισης πλακών.

Πώς να σφραγίσετε μια πλάκα PCR

Μέθοδος σφράγισης πλάκας

Αυτοκόλλητο

1. Βεβαιωθείτε ότι εργάζεστε σε μια επίπεδη και σταθερή επιφάνεια εργασίας

2. Αφαιρέστε την μεμβράνη από τη συσκευασία της και αφαιρέστε το πίσω μέρος

3. Τοποθετήστε προσεκτικά τη σφράγιση στην πλάκα, φροντίζοντας παράλληλα να είναι καλυμμένες όλες οι κοιλότητες

4. Χρησιμοποιήστε ένα εργαλείο εφαρμογής για να ασκήσετε πίεση στην πλάκα. Ξεκινήστε από το ένα άκρο και προχωρήστε προς το άλλο, πιέζοντας ομοιόμορφα.

5. Επαναλάβετε αυτό πολλές φορές

6. Περάστε τον εφαρμοστή σας γύρω από τις εξωτερικές κοιλότητες, για να βεβαιωθείτε ότι και αυτές είναι σωστά σφραγισμένες.

Θερμοκολλήσεις

Οι θερμοκολλήσεις λειτουργούν λιώνοντας την μεμβράνη στο χείλος κάθε φρεατίου, με τη βοήθεια ενός στεγανοποιητικού πλάκας. Για να χρησιμοποιήσετε ένα θερμοκολλητικό, ανατρέξτε στις οδηγίες που παρέχονται από τον κατασκευαστή του εξοπλισμού. Βεβαιωθείτε ότι ο κατασκευαστής από τον οποίο προμηθεύεστε τον εξοπλισμό σας είναι αξιόπιστος, καθώς είναι πολύ σημαντικό η σφράγιση να είναι σωστή, αποτελεσματική και στεγανή.

Κορυφαίες συμβουλές για τη σφράγιση πλακών

α. Όταν ασκείτε πίεση στη στεγανοποίηση, πιέστε τόσο σε οριζόντια όσο και σε κάθετη κατεύθυνση για να διασφαλίσετε τη σωστή στεγανοποίηση.

β. Είναι πάντα καλή πρακτική να εκτελείτε μια δοκιμαστική λειτουργία ό,τι κάνετε, και αυτό δεν διαφέρει και με τη σφράγιση πλάκας. Δοκιμάστε με μια άδεια πλάκα πριν χρησιμοποιήσετε μια με δείγματα.

γ. Κατά τη δοκιμή, αφαιρέστε τη σφράγιση και ελέγξτε αν η κόλλα έχει κολλήσει σωστά, χωρίς κενά. Υπάρχει μια οπτική αναπαράσταση αυτού στο πρώτο έγγραφο αναφοράς. Εάν δεν έχετε σφραγίσει σωστά την πλάκα, όταν αφαιρέσετε τη σφράγιση θα υπάρχουν κενά όπου η κόλλα δεν έχει κολλήσει πλήρως στην πλάκα.

δ. Για την αποστολή και μεταφορά δειγμάτων, ίσως σας φανεί χρήσιμο να εφαρμόσετε μια πλαστική σφράγιση πάνω από τη σφράγιση αλουμινίου για επιπλέον προστασία (ειδικά από τρύπημα).

ε. Να βεβαιώνεστε πάντα ότι δεν υπάρχουν εξογκώματα ή ρυτίδες κατά την εφαρμογή της μεμβράνης - αυτά θα προκαλέσουν διαρροές και εξάτμιση