Sådan forsegler du en PCR-plade

Indledning

PCR-plader, en fast bestanddel af laboratoriet i mange år, bliver endnu mere udbredte i moderne miljøer, efterhånden som laboratorier skalerer deres gennemløb og i stigende grad anvender automatisering i deres arbejdsgange. Det kan være vanskeligt at nå disse mål, samtidig med at nøjagtigheden og integriteten af ​​eksperimenter bevares. Et af de almindelige områder, hvor fejl kan snige sig ind, er med forseglingen afPCR-plader, med dårlig teknik, der tillader fordampning af prøver, ændrer pH-værdien og dermed forstyrrer enzymatiske funktioner og inviterer til kontaminering. At lære at forsegle enPCR-pladeeliminerer disse risici korrekt og sikrer reproducerbare resultater.

Find den rigtige tætning til din PCR-plade

Pladehætter vs. filmtætninger vs. låg
Kasketterer en god måde at forsegle din tallerken med en tæt forsegling, samtidig med at du stadig har fleksibiliteten til meget nemt at åbne og genforsegle tallerkenen efter behov uden spild. Låg har dog et par vigtige ulemper.

For det første skal du købe den specifikke hætte, der er kompatibel, hvilket gør dem ikke alsidige. Du skal sørge for, at den hætte, du vælger, passer til pladen, hvilket afhænger af producenten, og vælge enten kuppelformet eller flad baseret på den termocykler, du bruger.

For det andet kan det være meget gentagende og besværligt at påsætte hætterne på pladen, med risiko for krydskontaminering, hvis du sætter den forkerte hætte på den forkerte brønd.

Selvom filmforseglinger er mindre fleksible med hensyn til at fjerne og udskifte, er de meget alsidige, da de passer til enhver type PCR-plade, uanset producenten. De kan nemt skæres til i størrelse, hvilket gør dem meget effektive.

En anden mulighed er et pladelåg. Disse tilbyder mindre beskyttelse end hætter og forseglinger og bruges primært kun til kortvarig dækning for at forhindre kontaminering.

Optiske vs. foliefilmforseglinger

Uanset om du har brug for en optisk, klar forsegling eller enaluminiumsfoliefilmAt forsegle din tallerken afhænger af dit eksperimentelle format.Optiske forseglingsfilmer transparente, så du kan observere prøver, samtidig med at de beskyttes og fordampning forhindres. De er også særligt nyttige i qPCR-eksperimenter, som involverer meget præcise målinger af fluorescens direkte fra pladen. I så fald skal du bruge en forseglingsfilm, der filtrerer så lidt fluorescens som muligt. Det er vigtigt at sikre, at den forsegling eller hætte, du bruger, har en tilstrækkelig høj optisk klarhed til at sikre, at aflæsningerne er nøjagtige.

Foliefilm er velegnede til prøver, der er lysfølsomme eller skal opbevares ved temperaturer under 80 °C. Af denne grund kræver de fleste prøver, der er beregnet til langtidsopbevaring, en foliefilm. Foliefilm er også gennemborelige, hvilket er nyttigt til enten undersøgelse af individuelle brønde eller til overførsel af prøver med nåle. Dette kan ske manuelt eller som en del af en robotplatform.

Overvej også, at aggressive stoffer, som omfatter syrer, baser eller opløsningsmidler, kræver en tætning, der kan modstå dem. I så fald er en folietætning sandsynligvis mere passende.

Klæbende vs. varmeforseglingsfilm
Selvklæbende filmforseglingerer meget ligetil og nemme at påføre. Alt du behøver er, at en bruger påfører forseglingen på pladen og bruger et simpelt applikatorværktøj til at trykke ned og danne en tæt forsegling.

Varmeforseglinger er mere avancerede og giver en længerevarende forsegling med reduceret fordampningshastighed sammenlignet med en konventionel klæbeforsegling. Denne mulighed er passende, hvis du ønsker at opbevare prøver på lang sigt, selvom dette medfører et yderligere krav til pladeforseglingsudstyr.

Sådan forsegler du en PCR-plade

Pladeforseglingsmetode

Selvklæbende

1. Sørg for at du arbejder på en flad og stabil arbejdsflade

2. Tag filmen ud af emballagen, og fjern bagsiden

3. Placer forsigtigt forseglingen på pladen, mens du sørger for, at alle brøndene er dækket.

4. Brug et applikatorværktøj til at påføre tryk på tværs af pladen. Start fra den ene ende og arbejd dig over til den anden, mens du trykker jævnt.

5. Gentag dette adskillige gange

6. Kør din applikator rundt om de ydre brønde for at sikre, at disse også er ordentligt forseglet.

Varmeforseglinger

Varmeforseglinger fungerer ved at smelte filmen fast til kanten af ​​hver brønd ved hjælp af en pladeforsegler. For at betjene en varmeforsegler skal du se instruktionerne fra udstyrets producent. Sørg for, at den producent, du køber dit udstyr fra, er velrenommeret, da det er meget vigtigt, at forseglingen er korrekt, effektiv og vandtæt.

De bedste tips til pladeforsegling

a. Når du påfører tryk på tætningen, skal du gå i både vandret og lodret retning for at sikre en korrekt tætning

b. Det er altid god praksis at lave en testkørsel af det, du laver, og dette er ikke anderledes med pladeforsegling. Test med en tom plade, før du bruger en med prøver.

c. Fjern forseglingen under testen, og se om klæbemidlet sidder ordentligt fast uden mellemrum. Der er en visuel repræsentation af dette i det første referencedokument. Hvis du ikke har forseglet pladen korrekt, vil der være mellemrum, hvor klæbemidlet ikke har bundet helt til pladen, når du fjerner forseglingen.

d. Ved forsendelse og transport af prøver kan det være nyttigt at anvende en plastikforsegling oven på folieforseglingen for ekstra beskyttelse (især mod gennemboring).

e. Sørg altid for, at der ikke er buler eller rynker, når du påfører filmen – disse vil forårsage lækager og fordampning