Hur man förseglar en PCR-platta

Introduktion

PCR-plattor, en viktig del av laboratoriet under många år, blir allt vanligare i den moderna miljön i takt med att laboratorier skalar upp sin genomströmning och i allt högre grad använder automatisering i sina arbetsflöden. Att uppnå dessa mål samtidigt som man bevarar noggrannheten och integriteten i experimenten kan vara svårt. Ett av de vanligaste områdena där fel kan smyga sig in är med förseglingen avPCR-plattor, med dålig teknik som tillåter avdunstning av prover, vilket förändrar pH-värdet och därmed stör enzymatiska funktioner, och inbjuder till kontaminering. Att lära sig att försegla enPCR-plattaeliminerar dessa risker på rätt sätt och säkerställer reproducerbara resultat.

Hitta rätt tätning för din PCR-platta

Plattlock kontra filmtätningar kontra lock
Kepsarär ett bra sätt att försegla din tallrik tätt, samtidigt som du fortfarande har flexibiliteten att enkelt öppna och återförsluta tallriken efter behov utan spill. Korkar har dock ett par viktiga nackdelar.

Först måste du köpa ett specifikt lock som är kompatibelt, vilket gör dem otillgängliga. Du måste se till att locket du väljer passar plattan, vilket beror på tillverkaren, och välja antingen välvd eller platt baserat på vilken termocykler du använder.

För det andra kan det vara mycket repetitivt och mödosamt att sätta på locken på plattan, med risk för korskontaminering om man sätter på fel lock på fel brunn.

Även om filmtätningar är mindre flexibla när det gäller att ta bort och byta ut, är de mycket mångsidiga eftersom de passar alla typer av PCR-plattor, oavsett tillverkare. De kan enkelt skäras till rätt storlek, vilket gör dem mycket effektiva.

Ett annat alternativ är ett lock med plattor. Dessa ger mindre skydd än kapsyler och tätningar, och används huvudsakligen endast för kortvarig täckning för att förhindra kontaminering.

Optiska kontra foliefilmtätningar

Oavsett om du behöver en optisk, klar tätning eller enaluminiumfoliefilmAtt försegla din tallrik bestäms av ditt experimentella format.Optiska tätningsfilmerär transparenta så att du kan observera prover, samtidigt som de skyddas och förhindrar avdunstning. De är också särskilt användbara i qPCR-experiment som innebär att man gör mycket exakta mätningar av fluorescens direkt från plattan, i vilket fall du behöver en tätningsfilm som filtrerar bort så lite fluorescens som möjligt. Det är viktigt att se till att tätningen eller locket du använder har en tillräckligt hög optisk klarhet för att säkerställa att avläsningarna är korrekta.

Foliefilmer är lämpliga för alla prover som är ljuskänsliga eller som ska förvaras vid under 80 °C. Av denna anledning kräver de flesta prover som är avsedda för långtidslagring en foliefilm. Foliefilmer är också genomstickbara, vilket är användbart för antingen undersökning av enskilda brunnar eller för överföring av prover med nålar. Detta kan ske manuellt eller som en del av en robotplattform.

Tänk också på att aggressiva ämnen som inkluderar syror, baser eller lösningsmedel kräver en tätning som tål dem, i vilket fall en folietätning sannolikt är mer lämplig.

Lim kontra värmeförseglingsfilm
Självhäftande filmtätningarär mycket enkla och lätta att applicera. Allt du behöver göra är att användaren applicerar tätningen på plattan och använder ett enkelt applikatorverktyg för att trycka ner och skapa en tät försegling.

Värmeförsegling är mer avancerade och ger en mer hållbar försegling med minskad avdunstningshastighet jämfört med en konventionell självhäftande försegling. Detta alternativ är lämpligt om du vill lagra prover på lång sikt, även om detta medför ett ytterligare krav på plattförseglingsutrustning.

Hur man förseglar en PCR-platta

Plattförseglingsmetod

Självhäftande

1. Se till att du arbetar på en plan och stabil arbetsyta

2. Ta ut filmen ur förpackningen och ta bort baksidan

3. Placera försiktigt förseglingen på plattan och se till att alla brunnar är täckta.

4. Använd ett applikatorverktyg för att applicera tryck över plattan. Börja från ena änden och arbeta dig över till den andra, tryck jämnt.

5. Upprepa detta flera gånger

6. Kör applikatorn runt de yttre brunnarna för att se till att dessa också är ordentligt förseglade.

Värmeförseglingar

Värmeförseglingar fungerar genom att smälta filmen mot kanten av varje brunn med hjälp av en plattförseglare. För att använda en värmeförseglare, se instruktionerna från utrustningens tillverkare. Se till att tillverkaren du köper din utrustning från är pålitlig, eftersom det är mycket viktigt att förseglingen är korrekt, effektiv och vattentät.

De bästa tipsen för plattförsegling

a. När du applicerar tryck på tätningen, gå i både horisontell och vertikal riktning för att säkerställa en korrekt tätning

b. Det är alltid bra att göra en testkörning av vad du än gör, och detta är inte annorlunda med plattförsegling. Testa med en tom platta innan du använder en med prover.

c. Ta bort förseglingen vid testet och kontrollera att limmet fäster ordentligt, utan några glipor. Det finns en visuell representation av detta i det första referensdokumentet. Om du inte har förseglat plattan ordentligt kommer det att finnas glipor där limmet inte har fäst ordentligt vid plattan när du tar bort förseglingen.

d. Vid frakt och transport av prover kan det vara bra att applicera en plastförsegling ovanpå folieförseglingen för extra skydd (särskilt mot genomborrning).

e. Se alltid till att det inte finns några bulor eller veck när du applicerar filmen – dessa orsakar läckage och avdunstning