Mikropipeta je pravdepodobne najpoužívanejším nástrojom v laboratóriu. Používajú ju vedci v širokej škále odvetví vrátane akademickej obce, nemocníc a forenzných laboratórií, ako aj pri vývoji liekov a vakcín na prenos presných, veľmi malých množstiev kvapaliny.
Aj keď môže byť nepríjemné a frustrujúce spozorovať vzduchové bubliny v hrote jednorazovej pipety, ak si ich nevšimnete alebo ignorujete, môže to mať obrovský vplyv na spoľahlivosť a reprodukovateľnosť výsledkov.
Dobrou správou je, že existuje niekoľko jednoduchých opatrení, ktoré môžete podniknúť, aby ste predišli tvorbe vzduchových bublín a zlepšili efektivitu laboratória, spokojnosť operátorov, ako aj presnosť a precíznosť výsledkov.
Nižšie preskúmame následky, ak sa v hrote pipety objaví vzduchová bublina, a čo by ste mali robiť ďalej.
Dôsledok bublín vŠpička pipety
Aj keď používate najpresnejšie, najkvalitnejšie, dobre udržiavané, servisované a kalibrované pipety, spoľahlivosť vašich výsledkov môže byť ovplyvnená laboratórnymi chybami. Keď sa do pipety dostanú bublinytipmôže to mať niekoľko výsledkov.
● Keď používateľ spozoruje vzduchovú bublinu, musí stráviť čas správnym dávkovaním nasátej kvapaliny, vysunutím hrotu a odznova spustiť proces.
● Nedetekované vzduchové bubliny môžu viesť k nízkemu objemovému prenosu, a tým zmeniť koncentráciu reakčných zmesí, čo vedie k neúspešným experimentom a pochybným alebo nespoľahlivým výsledkom.
Tieto výsledky môžu mať niekoľko dôsledkov (1).
● Znížená efektivita laboratória – Testy a rozbory sa budú musieť opakovať, čo spôsobí značné náklady na prácu a materiál.
● Pochybné alebo nesprávne výsledky testov – Ak sa zverejnia nesprávne výsledky, môže to mať vážnejšie následky vrátane nesprávnej diagnózy a zlých výsledkov liečby pacientov.
● Stiahnutie rukopisov z časopisov – Ak kolegovia nedokážu zopakovať vaše výsledky kvôli vzduchovým bublinám spôsobujúcim nepresné výsledky, články môžu byť stiahnuté.
Najlepšie postupy na zabránenie vzniku vzduchových bublín
Vo väčšine prípadov sú vzduchové bubliny v špičkách pipiet spôsobené chybou obsluhy. Základným problémom je zvyčajne nesprávna technika z dôvodu nedostatočného zaškolenia alebo únavy.
Pipetovanie je zručná operácia, ktorá si vyžaduje 110 % pozornosť, riadny tréning a prax na dosiahnutie konzistentných a presných výsledkov.
Hoci existuje niekoľko vecí, ktoré môžete urobiť na zníženie všeobecných chýb pri pipetovaní, nižšie uvádzame niekoľko osvedčených postupov, ktoré možno použiť na zabránenie vzniku vzduchových bublín vhroty pipety.
Zlepšite techniku používateľov
Pomaly pipetujte
Ak sa piest pri nasávaní uvoľní príliš rýchlo, do hrotu sa môžu dostať vzduchové bubliny. To môže byť obzvlášť problematické pri prenose viskóznych kvapalín. Podobný efekt môže nastať, ak sa piest po dávkovaní uvoľní príliš rýchlo.
Aby ste sa pri nasávaní vyhli tvorbe vzduchových bublín, dbajte na to, aby ste piest manuálnych pipiet ovládali plynulo a pravidelne a vyvíjali konzistentnú silu.
Použite správnu hĺbku ponorenia
Ak sa hrot pipety neponorí dostatočne hlboko pod meniskus zásobníka kvapaliny, môže to viesť k nasatiu vzduchu a tým k tvorbe bublín.
Príliš hlboké ponorenie hrotu však môže v dôsledku zvýšeného tlaku nasať viac kvapaliny alebo sa na vonkajšej strane hrotu môžu objaviť kvapky, preto je dôležité hrot ponoriťhrot pipetydo správnej hĺbky.
Odporúčaná hĺbka sa líši v závislosti od veľkosti, typu a značky pipety. Hoci by sa mali dodržiavať odporúčania výrobcu, tu je všeobecný návod od Národného fyzikálneho laboratória.
Sprievodca hĺbkou ponorenia hrotu
Objem pipety (µl) a hĺbka ponorenia (mm)
- 1 – 100: 2 – 3
- 100 – 1 000: 2 – 4
- 1 000 – 5 000: 2 – 5
PredvlhčenieŠpičky pipety
Pri pipetovaní objemov väčších ako 10 µlhroty pipetysa zvyčajne vopred navlhčia tak, že sa niekoľkokrát naplnia dávkovanou kvapalinou a vypustia sa do odpadu, aby sa zvýšila presnosť.
Ak ich vopred nenavlhčíte, môže to viesť k tvorbe vzduchových bublín, najmä pri použití viskóznych alebo hydrofóbnych kvapalín. Aby ste predišli tvorbe vzduchových bublín, pri pipetovaní objemu väčšieho ako 10 µl najskôr navlhčite špičky.
Ak je to vhodné, použite techniky reverzného pipetovania
Viskózne látky: Bežným problémom pri pipetovaní viskóznych látok, ako sú roztoky bielkovín alebo nukleových kyselín, glycerol a Tween 20/40/60/80, je častá tvorba bublín pri použití techniky pipetovania dopredu.
Pomalé pipetovanie pomocou techniky spätného pipetovania znižuje riziko tvorby bublín pri prenose viskóznych roztokov.
Technika ELISA
Pri pipetovaní malých objemov do sa odporúča aj spätné pipetovanie.96-jamkové mikrotestovacie platničkypre techniky ELISA. Keď sa pri pridávaní činidiel do pipety nasávajú vzduchové bubliny alebo sa dávkujú do jamiek, môže to ovplyvniť hodnoty optickej hustoty a výsledky. Na minimalizáciu alebo odstránenie tohto problému sa odporúča spätné pipetovanie.
Používajte ergonomické pipety
Staré pipety, ktoré neboli navrhnuté s ohľadom na ergonómiu, vyžadujú viac fyzickej námahy, unavíte sa a vaša pipetovacia technika sa stáva nedbalou a nekvalitnou. Vyššie uvedené chyby, ako napríklad rýchle uvoľnenie piestu, sa môžu vyskytovať častejšie.
Investíciou do ergonomickejšieho riešenia si budete môcť udržať vynikajúcu techniku a zabrániť tvorbe vzduchových bublín v dôsledku nesprávnej techniky.
Nájdite si čas na školenie zamestnancov
Pravidelné školenie a hodnotenie personálu v technikách pipetovania môže zabezpečiť zníženie chýb obsluhy a tvorby vzduchových bublín.
Zvážte automatizovanejšie riešenia
Ako už bolo uvedené, väčšinu vzduchových bublín spôsobuje operátor. Chyby operátora a pohodlie je možné znížiť použitím elektronických pipiet alebo flexibilnej platformy na manipuláciu s kvapalinami, ako je napríkladRobot Agilent Bravo pre manipuláciu s kvapalinami.
Používajte dobrú kvalituŠpičky pipety
Mikropipety sa zvyčajne kupujú opatrne, ale často sa venuje malá pozornosť kvalite jednorazovej pipetovacej špičky. Vzhľadom na vplyv, ktorý má špička na výsledky pipetovania, norma ISO 8655 vyžaduje dodatočnú kalibráciu, ak sa používajú pipety a špičky od rôznych výrobcov.
Môže to byť preto, že mnohé lacné hroty môžu na prvý pohľad vyzerať dobre, ale keď si ich pozorne prezriete, môžu mať záhyby, výčnelky, škrabance a vzduchové bubliny, alebo môžu byť ohnuté alebo obsahovať nečistoty.
Kúpa kvalitných špičiek vyrobených z vysoko kvalitného polypropylénu môže znížiť výskyt vzduchových bublín.
Na záver
Prítomnosť vzduchových bublín v hrote pipety má vplyv na efektivitu laboratória, ako aj na nepresnosť a nepresnosť výsledkov. Uviedli sme niekoľko vecí, ktoré môžete urobiť, aby ste predišli vniknutiu vzduchových bublín do...hrot pipety.
Ak je však kvalita nízkahroty pipetyspôsobujú vniknutie vzduchových bublín do špičky pipety, určite vás poteší, že naša univerzálna veľkosťhroty pipetysú vyrobené podľa najvyšších štandardov a sú vyrobené z prvotriedneho čistého polypropylénu.
Biomedicínska spoločnosť Suzhou AceVyrábajú vysoko kvalitné univerzálne pipetovacie špičky s objemom 10, 20, 50, 100, 200, 300, 1 000 a 1 250 µl, 96 špičiek/stojan. Výnimočná odolnosť – všetky stojany na špičky ACE zvládajú požiadavky používania s viackanálovými pipetami. Sterilné, s filtrom, bez RNáz/DNáz a nepyrogénne.
Vitajte a informujte sa u nás o ďalších podrobnostiach.
Čas uverejnenia: 29. decembra 2022