Como selar uma placa de PCR

Introdução

Placas de PCR, um elemento básico do laboratório por muitos anos, estão se tornando ainda mais prevalentes no ambiente moderno, à medida que os laboratórios aumentam sua produtividade e empregam cada vez mais a automação em seus fluxos de trabalho. Alcançar esses objetivos preservando a precisão e a integridade dos experimentos pode ser difícil. Uma das áreas comuns onde erros podem surgir é na vedação dePlacas de PCR, com técnica inadequada, permitindo a evaporação das amostras, alterando o pH e, portanto, interrompendo as funções enzimáticas, e convidando à contaminação. Aprendendo a selar umPlaca de PCRelimina corretamente esses riscos e garante resultados reproduzíveis.

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Tampas de placa vs. selos de filme vs. tampas
Bonéssão uma ótima maneira de selar seu prato com firmeza, ao mesmo tempo em que oferecem a flexibilidade de abrir e fechar o prato facilmente, conforme necessário, sem desperdício. No entanto, as tampas têm algumas desvantagens importantes.

Em primeiro lugar, você terá que comprar a tampa específica compatível, o que os torna pouco versáteis. Você terá que se certificar de que a tampa escolhida se encaixa na placa, o que depende do fabricante, e escolher entre abaulada ou plana, dependendo do termociclador que estiver usando.

Em segundo lugar, aplicar as tampas na placa pode ser muito repetitivo e tedioso, com risco de contaminação cruzada se você colocar a tampa errada no poço errado.

Embora as vedações de filme sejam menos flexíveis em termos de remoção e substituição, elas são muito versáteis, pois se adaptam a qualquer tipo de placa de PCR, independentemente do fabricante. Elas podem ser simplesmente cortadas no tamanho desejado, o que as torna muito eficazes.

Outra opção é uma tampa de placa. Ela oferece menos proteção do que tampas e lacres, e é usada principalmente para cobertura de curto prazo, evitando contaminação.

Selos de filme óptico vs. de folha metálica

Se você precisa de uma vedação óptica transparente ou de umafilme de papel alumínioselar sua placa é decidido pelo seu formato experimental.Películas de vedação ópticaSão transparentes para permitir a observação das amostras, protegendo-as e evitando a evaporação. São também particularmente úteis em experimentos de qPCR, que envolvem medições de fluorescência altamente precisas diretamente da placa. Nesse caso, será necessária uma película de vedação que filtre o mínimo possível de fluorescência. É importante garantir que a vedação ou tampa utilizada tenha um nível de clareza óptica suficientemente alto para garantir a precisão das leituras.

Filmes laminados são apropriados para qualquer amostra sensível à luz ou que deva ser armazenada abaixo de 80 °C. Por esse motivo, a maioria das amostras destinadas a armazenamento de longo prazo exigirá um filme laminado. Os filmes laminados também são perfuráveis, o que é útil para examinar poços individuais ou para a transferência de amostras por agulhas. Isso pode ser feito manualmente ou por meio de uma plataforma robótica.

Considere também que substâncias agressivas, como ácidos, bases ou solventes, exigirão uma vedação que possa resistir a elas. Nesse caso, uma vedação de folha metálica é provavelmente mais apropriada.

Filme adesivo vs. filme de selagem a quente
Selos de filme adesivosão muito simples e fáceis de aplicar. Tudo o que você precisa é que o usuário aplique o selante na placa e use um aplicador simples para pressionar e formar uma vedação firme.

As selagens térmicas são mais avançadas, proporcionando uma vedação mais duradoura com taxas de evaporação reduzidas em comparação com uma selagem adesiva convencional. Esta opção é adequada se você pretende armazenar amostras a longo prazo, embora isso implique um requisito adicional para equipamento de selagem de placas.

Como selar uma placa de PCR

Método de selagem de placas

Autoadesivo

1. Certifique-se de que está trabalhando em uma superfície de trabalho plana e estável

2. Retire o filme da embalagem e remova o suporte

3. Coloque cuidadosamente o selo na placa, certificando-se de que todos os poços estejam cobertos

4. Use um aplicador para aplicar pressão sobre a placa. Comece de uma extremidade e vá até a outra, pressionando uniformemente.

5. Repita isso inúmeras vezes

6. Passe o aplicador ao redor dos poços externos para garantir que eles também estejam devidamente selados.

Selos térmicos

As seladoras térmicas funcionam derretendo a película na borda de cada poço, com a ajuda de uma seladora de placas. Para operar uma seladora térmica, consulte as instruções fornecidas pelo fabricante do equipamento. Certifique-se de que o fabricante do equipamento seja confiável, pois é muito importante que a selagem seja adequada, eficaz e estanque.

Dicas importantes para selar placas

a. Ao aplicar pressão na vedação, faça-o nas direções horizontal e vertical para garantir uma vedação adequada

b. É sempre uma boa prática fazer um teste de qualquer coisa que você esteja fazendo, e isso não é diferente com a selagem de placas. Teste com uma placa vazia antes de usar uma com amostras.

c. Ao testar, retire o lacre e verifique se o adesivo aderiu corretamente, sem falhas. Há uma representação visual disso no primeiro documento de referência. Se você não selou a placa corretamente, ao remover o lacre, haverá falhas onde o adesivo não aderiu totalmente à placa.

d. Para o transporte e o envio de amostras, pode ser útil aplicar um selo plástico sobre o lacre de alumínio para proteção extra (especialmente contra perfurações).

e. Certifique-se sempre de que não há saliências ou rugas ao aplicar o filme – isso causará vazamentos e evaporação