Hoe een PCR-plaat te verzegelen

Invoering

PCR-platen, al jarenlang een vast onderdeel van het laboratorium, worden steeds gebruikelijker in de moderne omgeving, nu laboratoria hun doorvoer opschalen en steeds meer automatisering in hun workflows toepassen. Het bereiken van deze doelstellingen met behoud van de nauwkeurigheid en integriteit van experimenten kan lastig zijn. Een van de meest voorkomende gebieden waar fouten kunnen ontstaan, is bij het verzegelen vanPCR-platen, met een slechte techniek die verdamping van monsters mogelijk maakt, de pH verandert en daardoor de enzymatische functies verstoort, en besmetting uitlokt. Leren hoe je eenPCR-plaatdeze risico's op de juiste wijze uitsluit en reproduceerbare resultaten garandeert.

Vind de juiste afdichting voor uw PCR-plaat

Plaatdoppen vs. folieafdichtingen vs. deksels
Doppenzijn een goede manier om je bord goed af te sluiten, terwijl je toch de flexibiliteit hebt om het bord gemakkelijk te openen en te sluiten wanneer je het nodig hebt, zonder verspilling. Doppen hebben echter een paar belangrijke nadelen.

Ten eerste moet je een specifieke dop kopen die compatibel is, waardoor ze niet veelzijdig zijn. Je moet ervoor zorgen dat de dop die je kiest op de plaat past, wat afhankelijk is van de fabrikant, en kiezen voor een bolle of platte dop, afhankelijk van de thermocycler die je gebruikt.

Ten tweede kan het aanbrengen van de doppen op de plaat een erg repetitief en vervelend werkje zijn, met het risico op kruisbesmetting als u de verkeerde dop op de verkeerde holte plaatst.

Hoewel foliezegels minder flexibel zijn wat betreft verwijderen en vervangen, zijn ze zeer veelzijdig omdat ze op elk type PCR-plaat passen, ongeacht de fabrikant. Ze kunnen eenvoudig op maat worden geknipt, waardoor ze zeer effectief zijn.

Een andere optie is een deksel met een plaat. Deze bieden minder bescherming dan doppen en zegels en worden meestal alleen gebruikt voor korte afdekking om besmetting te voorkomen.

Optische vs. foliefilmafdichtingen

Of u nu een optische, heldere afdichting nodig heeft of eenaluminiumfolieHoe u uw bord afsluit, wordt bepaald door uw experimentele formaat.Optische afdichtingsfilmsZijn transparant, zodat u monsters kunt observeren, terwijl ze toch beschermd zijn en verdamping voorkomen. Ze zijn ook bijzonder nuttig bij qPCR-experimenten waarbij zeer nauwkeurige fluorescentiemetingen rechtstreeks vanaf de plaat worden uitgevoerd. In dat geval hebt u een afsluitfolie nodig die zo min mogelijk fluorescentie filtert. Het is belangrijk om ervoor te zorgen dat de verzegeling of dop die u gebruikt een voldoende hoge optische helderheid heeft om nauwkeurige metingen te garanderen.

Foliefilms zijn geschikt voor lichtgevoelige monsters of monsters die bewaard moeten worden bij temperaturen lager dan 80 °C. Daarom hebben de meeste monsters die bestemd zijn voor langdurige opslag een foliefilm nodig. Foliefilms zijn ook doorprikbaar, wat handig is voor het onderzoeken van individuele wells of voor het overbrengen van monsters met behulp van naalden. Dit kan handmatig of via een robotplatform.

Houd er ook rekening mee dat agressieve stoffen, zoals zuren, basen of oplosmiddelen, een afdichting vereisen die hiertegen bestand is. In dat geval is een folieafdichting waarschijnlijk geschikter.

Lijm- versus hitte-afdichtfolie
Zelfklevende folie afdichtingenzijn zeer eenvoudig en gemakkelijk aan te brengen. Het enige wat u hoeft te doen, is de afdichting op de plaat aan te brengen en met een eenvoudig applicatorgereedschap aan te drukken en een goede afdichting te vormen.

Heatseals zijn geavanceerder en bieden een duurzamere seal met een lagere verdampingssnelheid in vergelijking met een conventionele lijmseal. Deze optie is geschikt als u monsters langdurig wilt bewaren, hoewel hiervoor wel extra apparatuur voor het sealen van platen nodig is.

Hoe een PCR-plaat te verzegelen

Plaatafdichtingsmethode

Zelfklevend

1. Zorg ervoor dat u op een vlak en stabiel werkoppervlak werkt

2. Haal de folie uit de verpakking en verwijder de achterkant

3. Plaats de verzegeling voorzichtig op de plaat, terwijl u ervoor zorgt dat alle putjes bedekt zijn

4. Gebruik een applicator om druk uit te oefenen op de plaat. Begin aan de ene kant en werk naar de andere kant toe, waarbij je gelijkmatig drukt.

5. Herhaal dit meerdere keren

6. Ga met de applicator langs de buitenste holtes om te controleren of deze ook goed zijn afgedicht.

Hitteafdichtingen

Heatseals werken door de folie met behulp van een platensealer aan de rand van elke well te smelten. Raadpleeg voor het gebruik van een heatsealer de instructies van de fabrikant van de apparatuur. Zorg ervoor dat de fabrikant van uw apparatuur een goede reputatie heeft, want het is erg belangrijk dat de seal goed, effectief en waterdicht is.

Toptips voor het afdichten van platen

a. Wanneer u druk uitoefent op de afdichting, doe dit dan zowel horizontaal als verticaal om een ​​goede afdichting te garanderen.

b. Het is altijd verstandig om een ​​testrun uit te voeren met wat u ook doet, en dat geldt ook voor het sealen van platen. Test met een lege plaat voordat u er een met monsters gebruikt.

c. Verwijder tijdens het testen de verzegeling en controleer of de lijm goed hecht, zonder openingen. Een visuele weergave hiervan vindt u in het eerste referentiedocument. Als u de plaat niet goed hebt afgedicht, zullen er bij het verwijderen van de verzegeling openingen ontstaan ​​waar de lijm niet volledig aan de plaat hecht.

d. Voor het verzenden en vervoeren van monsters kan het handig zijn om een ​​plastic verzegeling over de foliezegel aan te brengen voor extra bescherming (met name tegen doorboring).

e. Zorg er altijd voor dat er geen oneffenheden of rimpels ontstaan ​​bij het aanbrengen van de folie – deze veroorzaken lekken en verdamping.