Johdanto
PCR-levyt, jotka ovat olleet laboratorioiden perustyökaluja jo vuosia, yleistyvät nykyaikaisessa ympäristössä, kun laboratoriot lisäävät läpivirtaustaan ja käyttävät yhä enemmän automaatiota työnkuluissaan. Näiden tavoitteiden saavuttaminen samalla kun säilytetään kokeiden tarkkuus ja eheys, voi olla vaikeaa. Yksi yleisimmistä alueista, joilla virheitä voi hiipiä sisään, on tiivistysmateriaalien kanssa.PCR-levyt, huonolla tekniikalla, joka mahdollistaa näytteiden haihtumisen, muuttaa pH:ta ja siten häiritsee entsymaattisia toimintoja ja altistaa kontaminaatiolle. Opitaan sulkemaanPCR-levypoistaa nämä riskit oikein ja varmistaa toistettavat tulokset.
Löydä oikea tiiviste PCR-levyllesi
Levykorkit vs. kalvotiivisteet vs. kannet
Lippiksetovat hyvä tapa sulkea lautanen tiiviisti, mutta samalla voit helposti avata ja sulkea lautasen uudelleen tarpeen mukaan ilman jätettä. Korkeilla on kuitenkin pari keskeistä haittapuolta.
Ensinnäkin sinun on ostettava yhteensopiva korkki, mikä tekee niistä epäsopivia. Sinun on varmistettava, että valitsemasi korkki sopii levyyn, mikä riippuu sen valmistajasta, ja valittava joko kupumainen tai litteä korkki käyttämäsi termosyklerin mukaan.
Toiseksi, korkkien kiinnittäminen levyyn voi olla hyvin toistuvaa ja työlästä, ja jos väärä korkki asetetaan väärään kuoppaan, voi syntyä ristikontaminaation riski.
Vaikka kalvotiivisteet ovat vähemmän joustavia irrotuksen ja vaihdon suhteen, ne ovat erittäin monipuolisia, sillä ne sopivat kaikenlaisille PCR-levyille valmistajasta riippumatta. Ne voidaan yksinkertaisesti leikata kokoon, mikä tekee niistä erittäin tehokkaita.
Toinen vaihtoehto on lautaskansi. Nämä tarjoavat vähemmän suojaa kuin korkit ja tiivisteet, ja niitä käytetään pääasiassa vain lyhytaikaiseen suojaan kontaminaation estämiseksi.
Optiset vs. kalvotiivisteet
Tarvitsetpa sitten optisen, kirkkaan tiivisteen taialumiinifoliokalvoLevyn sulkeminen riippuu kokeellisesta muodostasi.Optiset tiivistyskalvotovat läpinäkyviä, jotta voit tarkkailla näytteitä samalla suojaten niitä ja estäen haihtumisen. Ne ovat myös erityisen hyödyllisiä qPCR-kokeissa, joissa tehdään erittäin tarkkoja fluoresenssimittauksia suoraan levyltä. Tällöin tarvitset tiivistekalvon, joka suodattaa pois mahdollisimman vähän fluoresenssia. On tärkeää varmistaa, että käyttämäsi tiiviste tai korkki on optisesti riittävän kirkas, jotta lukemat ovat tarkkoja.
Foliokalvot sopivat näytteille, jotka ovat valoherkkiä tai joita on tarkoitus säilyttää alle 80 °C:ssa. Tästä syystä useimmat pitkäaikaiseen säilytykseen tarkoitetut näytteet vaativat foliokalvon. Foliokalvot ovat myös lävistettäviä, mikä on hyödyllistä joko yksittäisten kaivojen tutkimisessa tai näytteiden siirtämisessä neulojen avulla. Tämä voi tapahtua manuaalisesti tai osana robottialustaa.
Huomioi myös, että aggressiiviset aineet, kuten hapot, emäkset tai liuottimet, vaativat niitä kestävän tiivisteen, jolloin foliosinetti on todennäköisesti sopivampi vaihtoehto.
Liima vs. lämpösaumauskalvo
Liimakalvotiivisteetovat erittäin yksinkertaisia ja helppoja asentaa. Käyttäjän tarvitsee vain kiinnittää tiiviste levyyn ja painaa se alas yksinkertaisella levitystyökalulla tiiviin tiivisteen muodostamiseksi.
Lämpösaumaukset ovat kehittyneempiä, ja ne tarjoavat pidempikestoisemman ja hitaamman saumauksen verrattuna perinteiseen liima-aineeseen. Tämä vaihtoehto sopii, jos haluat säilyttää näytteitä pitkäaikaisesti, vaikkakin se vaatii lisälaitteita levyjen sulkemiseen.
PCR-levyn sulkeminen
Levyn tiivistysmenetelmä
Itseliimautuva
1. Varmista, että työskentelet tasaisella ja vakaalla työtasolla
2. Poista kalvo pakkauksestaan ja poista taustapaperi.
3. Aseta tiiviste varovasti levylle varmistaen samalla, että kaikki kuopat peittyvät.
4. Käytä levitystyökalua paineen kohdistamiseen levyn poikki. Aloita toisesta päästä ja etene toiseen painamalla tasaisesti.
5. Toista tämä useita kertoja
6. Pyöritä applikaattoria ulkokuorten ympäri varmistaaksesi, että nekin ovat kunnolla kiinni.
Lämpötiivisteet
Lämpösaumaukset toimivat sulattamalla kalvon jokaisen kuopan reunaan levysaumauslaitteen avulla. Lämpösaumauslaitteen käytöstä on laitteen valmistajan toimittamat ohjeet. Varmista, että laitteen toimittaja on hyvämaineinen, sillä on erittäin tärkeää, että saumaus on asianmukainen, tehokas ja vesitiivis.
Vinkkejä levyjen tiivistämiseen
a. Kun kohdistat painetta tiivisteeseen, tee sitä sekä vaaka- että pystysuunnassa varmistaaksesi asianmukaisen tiivistyksen.
b. On aina hyvä käytäntö testata mitä tahansa tekemääsi, eikä tämä päde levyjen sulkemiseen. Testaa tyhjällä levyllä ennen kuin käytät näytteillä varustettua levyä.
c. Testauksen aikana poista sinetti ja tarkista, että liima on tarttunut kunnolla kiinni eikä siinä ole rakoja. Tästä on visuaalinen kuvaus ensimmäisessä viiteasiakirjassa. Jos et ole tiivistänyt levyä kunnolla, sinetin poistamisen jälkeen liima ei ole täysin tarttunut levyyn ja jää rakoja.
d. Näytteiden lähettämistä ja kuljetusta varten voi olla hyödyllistä kiinnittää muovisinetti foliotiivisteen päälle lisäsuojaksi (erityisesti lävistykseltä).
e. Varmista aina, ettei kalvoa kiinnitettäessä ole kohoumia tai ryppyjä – ne aiheuttavat vuotoja ja haihtumista.
Julkaisun aika: 23.11.2022