Krijovialshuma komunement użati għall-ħażna krijoġenika ta' linji taċ-ċelloli u materjali bijoloġiċi kritiċi oħra, f'dewars mimlija b'nitroġenu likwidu.

Hemm diversi stadji involuti fil-preservazzjoni b'suċċess taċ-ċelloli fin-nitroġenu likwidu. Filwaqt li l-prinċipju bażiku huwa ffriżar bil-mod, it-teknika eżatta użata tiddependi mit-tip ta' ċellola u l-krijoprotettur użat. Hemm diversi kunsiderazzjonijiet ta' sikurezza u l-aħjar prattiki li għandhom jitqiesu meta jinħażnu ċ-ċelloli f'temperaturi daqshekk baxxi.

Din il-posta għandha l-għan li tagħti ħarsa ġenerali lejn kif il-krijokunjetti jinħażnu fin-nitroġenu likwidu.

X'inhuma l-Cryovials?

Il-krijoviali huma kunjetti żgħar b'tapp iddisinjati għall-ħażna ta' kampjuni likwidi f'temperaturi estremament baxxi. Dawn jiżguraw li ċ-ċelloli ppreservati fil-krijoprotettur ma jiġux f'kuntatt dirett man-nitroġenu likwidu, u b'hekk jimminimizzaw ir-riskju ta' ksur ċellulari filwaqt li xorta jibbenefikaw mill-effett estrem ta' tkessiħ tan-nitroġenu likwidu.

Il-kunjetti ġeneralment ikunu disponibbli f'firxa ta' volumi u disinji – jistgħu jkunu b'ħjut interni jew esterni b'qiegħ ċatt jew tond. Formati sterili u mhux sterili huma wkoll disponibbli.

Min JużaĊirovjalibiex Taħżen iċ-Ċelloli fin-Nitroġenu Likwidu

Firxa ta' laboratorji tal-NHS u privati, kif ukoll istituzzjonijiet ta' riċerka li jispeċjalizzaw fil-ħażna tad-demm tal-kurdun, il-bijoloġija taċ-ċelloli epiteljali, l-immunoloġija u l-bijoloġija taċ-ċelloli staminali jużaw krijovials biex jippreservaw iċ-ċelloli.

Iċ-ċelloli ppreservati b'dan il-mod jinkludu ċ-ċelloli B u T, iċ-ċelloli CHO, iċ-ċelloli staminali u progenituri ematopojetiċi, l-ibridomi, iċ-ċelloli intestinali, il-makrofaġi, iċ-ċelloli staminali u progenituri mesenkimali, il-monoċiti, il-mijeloma, iċ-ċelloli NK u ċ-ċelloli staminali pluripotenti.

Ħarsa ġenerali lejn Kif Taħżen il-Krijovials fin-Nitroġenu Likwidu

Il-krijopreservazzjoni hija proċess li jippreserva ċ-ċelloli u kostruzzjonijiet bijoloġiċi oħra billi jkessħilhom għal temperaturi baxxi ħafna. Iċ-ċelloli jistgħu jinħażnu f'nitroġenu likwidu għal snin sħaħ mingħajr telf ta' vijabbiltà taċ-ċelloli. Din hija deskrizzjoni fil-qosor tal-proċeduri użati.

Preparazzjoni taċ-Ċelloli

Il-metodu eżatt għat-tħejjija tal-kampjuni jvarja skont it-tip ta’ ċellula, iżda ġeneralment, iċ-ċelloli jinġabru u jiġu ċċentrifugati biex jiżviluppaw pellet rikk fiċ-ċelloli. Dan il-pellet imbagħad jerġa’ jiġi sospiż fis-supernatant imħallat ma’ krijoprotettur jew mezz ta’ krijopreservazzjoni.

Mezz ta' Kriopreservazzjoni

Dan il-mezz jintuża biex jippreserva ċ-ċelloli fl-ambjenti ta' temperatura baxxa li se jkunu soġġetti għalihom billi jinibixxi l-formazzjoni ta' kristalli intra u extraċellulari u għalhekk il-mewt taċ-ċelloli. Ir-rwol tagħhom huwa li jipprovdu ambjent sigur u protettiv għaċ-ċelloli u t-tessuti matul il-proċessi tal-iffriżar, il-ħażna u t-tidwib.

Mezz bħal plażma friska ffriżata (FFP), soluzzjoni ta' plasmaliti eparinizzati jew soluzzjonijiet ħielsa mis-serum u ħielsa mill-komponenti tal-annimali jitħallat ma' krijoprotetturi bħal dimetil sulfossid (DMSO) jew gliċerol.

Il-gerbub tal-kampjun likwifikat mill-ġdid jiġi alikwotat fi krijovials tal-polipropilene bħalKunjetti tal-Ħażna Krijoġeniċi tal-Kumpanija Bijomedika ta' Suzhou Ace.

Huwa importanti li l-krijokunjetti ma jimtlewx iżżejjed għax dan iżid ir-riskju ta’ qsim u l-possibbiltà ta’ rilaxx tal-kontenut (1).

Rata ta' Iffriżar Kontrollata

B'mod ġenerali, rata ta' ffriżar ikkontrollata bil-mod tintuża għall-krijopreservazzjoni b'suċċess taċ-ċelloli.

Wara li l-kampjuni jiġu alikwotati f'kunjetti krijoġeniċi, dawn jitqiegħdu fuq silġ imxarrab jew fi friġġ ta' 4℃ u l-proċedura tal-iffriżar tinbeda fi żmien 5 minuti. Bħala gwida ġenerali, iċ-ċelloli jitkessħu b'rata ta' -1 sa -3 kull minuta (2). Dan jinkiseb bl-użu ta' apparat li jkessaħ programmabbli jew billi l-kunjetti jitqiegħdu f'kaxxa iżolata mqiegħda fi friżer b'rata kkontrollata ta' –70°C sa –90°C.

Trasferiment għal Nitroġenu Likwidu

Il-kunjetti krijoġeniċi ffriżati mbagħad jiġu trasferiti għal tank tan-nitroġenu likwidu għal perjodi indefiniti sakemm tinżamm temperatura ta' inqas minn -135℃.

Dawn it-temperaturi ultra-baxxi jistgħu jinkisbu billi jiġu immersi fin-nitroġenu fil-fażi likwida jew tal-fwar.

Fażi Likwida jew tal-Fwar?

Il-ħażna fin-nitroġenu fil-fażi likwida hija magħrufa li żżomm it-temperatura kiesħa b'konsistenza assoluta, iżda ħafna drabi mhijiex rakkomandata għar-raġunijiet li ġejjin:

• Il-ħtieġa għal volumi kbar (fond) ta' nitroġenu likwidu li huwa periklu potenzjali. Ħruq jew soffokazzjoni minħabba dan huwa riskju reali.
• Każijiet dokumentati ta' kontaminazzjoni inkroċjata minn aġenti infettivi bħal aspergillus, hep B u tixrid virali permezz tal-mezz tan-nitroġenu likwidu (2,3)
• Il-potenzjal li n-nitroġenu likwidu jnixxi fil-kunjetti waqt l-immersjoni. Meta jitneħħa mill-ħażna u jissaħħan għat-temperatura tal-kamra, in-nitroġenu jespandi malajr. Konsegwentement, il-kunjett jista' jitfarrak meta jitneħħa mill-ħażna tan-nitroġenu likwidu, u joħloq periklu kemm minn debris li jtir kif ukoll minn espożizzjoni għall-kontenut (1, 4).

Għal dawn ir-raġunijiet, il-ħażna f'temperatura ultra-baxxa hija l-aktar komuni fin-nitroġenu fil-fażi tal-fwar. Meta l-kampjuni jkollhom jinħażnu fil-fażi likwida, għandhom jintużaw tubi cryoflex speċjalizzati.

L-iżvantaġġ tal-fażi tal-fwar huwa li jista' jseħħ gradjent vertikali tat-temperatura li jirriżulta f'varjazzjonijiet fit-temperatura bejn -135℃ u -190℃. Dan jirrikjedi monitoraġġ bir-reqqa u diliġenti tal-livelli tan-nitroġenu likwidu u l-varjazzjonijiet fit-temperatura (5).

Ħafna manifatturi jirrakkomandaw li l-krijokunjetti huma adattati għall-ħażna sa -135℃ jew għall-użu fil-fażi tal-fwar biss.

Tidwib taċ-Ċelloli Kriopreservati Tiegħek

Il-proċedura tat-tidwib hija stressanti għal kultura ffriżata, u huma meħtieġa mmaniġġjar u teknika xierqa biex tiġi żgurata l-vijabbiltà, l-irkupru u l-funzjonalità ottimali taċ-ċelloli. Il-protokolli eżatti tat-tidwib jiddependu fuq tipi speċifiċi ta' ċelloli. Madankollu, it-tidwib rapidu huwa kkunsidrat standard għal:

• Naqqas kwalunkwe impatt fuq l-irkupru ċellulari
• Jgħin biex inaqqas il-ħin ta' espożizzjoni għas-soluti preżenti fil-mezzi tal-iffriżar
• Imminimizza kwalunkwe ħsara permezz tar-rikristallizzazzjoni tas-silġ

Banjijiet tal-ilma, banjijiet taż-żibeġ, jew strumenti awtomatizzati speċjalizzati huma komunement użati biex idewbu l-kampjuni.

Ħafna drabi, linja waħda ta' ċelluli tiġi mdewba kull darba għal minuta jew tnejn, billi titħawwad bil-mod f'banju tal-ilma ta' 37℃ sakemm jibqa' ftit silġ fil-kunjett qabel ma jinħaslu f'mezz ta' tkabbir imsaħħan minn qabel.

Għal xi ċelloli bħall-embrijuni tal-mammiferi, it-tisħin bil-mod huwa essenzjali għas-sopravivenza tagħhom.

Iċ-ċelloli issa huma lesti għall-kultura taċ-ċelloli, l-iżolament taċ-ċelloli, jew fil-każ ta’ ċelloli staminali ematopojetiċi – studji ta’ vijabbiltà biex jiggarantixxu l-integrità taċ-ċelloli staminali tad-donatur qabel it-terapija mijeloablattiva.

Hija prattika normali li tieħu alikwoti żgħar tal-kampjun maħsul minn qabel użat biex twettaq għadd taċ-ċelloli biex tiddetermina l-konċentrazzjonijiet taċ-ċelloli għall-kisi fil-kultura. Imbagħad tista' tivvaluta r-riżultati tal-proċeduri ta' iżolament taċ-ċelloli u tiddetermina l-vijabbiltà taċ-ċelloli.

L-Aħjar Prattiki għall-Ħażna tal-Krijovials

Il-kriopreservazzjoni b'suċċess ta' kampjuni maħżuna fi krijovials tiddependi fuq ħafna elementi fil-protokoll inkluż ħażna xierqa u żamma ta' rekords.

• Aqsam iċ-ċelloli bejn il-postijiet tal-ħażna– Jekk il-volumi jippermettu, aqsam iċ-ċelloli bejn il-kunjetti u aħżinhom f'postijiet separati biex tnaqqas ir-riskju ta' telf ta' kampjuni minħabba ħsarat fit-tagħmir.
• Prevenzjoni ta' kontaminazzjoni inkroċjata– Agħżel kunjetti krijoġeniċi sterili li jintużaw darba biss jew awtoklavi qabel l-użu sussegwenti
• Uża kunjetti ta' daqs xieraq għaċ-ċelloli tiegħek– il-kunjetti jiġu f’firxa ta’ volumi bejn 1 u 5 ml. Evita li timla l-kunjetti żżejjed biex tnaqqas ir-riskju li jinkisru.
• Agħżel kunjetti krijoġeniċi b'ħjut interni jew esterni– Kunjetti b'ħjut interni huma rakkomandati minn xi universitajiet għal miżuri ta' sigurtà – jistgħu wkoll jipprevjenu l-kontaminazzjoni waqt il-mili jew meta jinħażnu fin-nitroġenu likwidu.
• Prevenzjoni tat-Tnixxija- Uża siġilli bi-injettati iffurmati fl-għatu bil-kamin jew fl-O-rings biex tevita t-tnixxija u l-kontaminazzjoni.
• Uża barcodes 2D u tikketta l-kunjetti– biex tiġi żgurata t-traċċabilità, il-kunjetti b'żoni kbar tal-kitba jippermettu li kull kunjett ikun ittikkettat b'mod adegwat. Il-barcodes 2D jistgħu jgħinu fil-ġestjoni tal-ħażna u ż-żamma tar-rekords. Tappijiet ikkodifikati bil-kulur huma utli għal identifikazzjoni aktar faċli.
• Manutenzjoni adegwata tal-ħażna- Biex jiġi żgurat li ċ-ċelloli ma jintilfux, il-kontenituri tal-ħażna għandhom jimmonitorjaw kontinwament it-temperatura u l-livelli tan-nitroġenu likwidu. Għandhom jitwaħħlu allarmi biex javżaw lill-utenti dwar żbalji.

Prekawzjonijiet ta' Sigurtà

In-nitroġenu likwidu sar prattika komuni fir-riċerka moderna iżda jġorr miegħu r-riskju ta' korriment serju jekk jintuża ħażin.

Għandu jintlibes tagħmir protettiv personali (PPE) xieraq biex jitnaqqas ir-riskju ta' ġlata, ħruq u inċidenti avversi oħra meta timmaniġġja nitroġenu likwidu. Ilbes

• Ingwanti krijoġeniċi
• Kowt tal-laboratorju
• Tarka sħiħa tal-wiċċ reżistenti għall-impatt li tkopri wkoll l-għonq
• Żraben magħluqin
• Fardal tal-plastik li ma jgħaddix ilma minnu

Ir-refriġeraturi tan-nitroġenu likwidu għandhom jitqiegħdu f'żoni ventilati sew biex jimminimizzaw ir-riskju ta' asfissija – in-nitroġenu li jaħrab jivvaporizza u jissostitwixxi l-ossiġnu atmosferiku. Il-ħwienet ta' volum kbir għandu jkollhom sistemi ta' allarm għal ossiġnu baxx.

Li taħdem f'pari meta timmaniġġja nitroġenu likwidu huwa ideali u l-użu tiegħu barra l-ħinijiet normali tax-xogħol għandu jkun ipprojbit.

Krijovials biex Jappoġġjaw il-Fluss tax-Xogħol Tiegħek

Il-kumpanija Suzhou Ace Biomedical toffri għażla wiesgħa ta’ prodotti li jissodisfaw il-bżonnijiet tiegħek ta’ krijopreservazzjoni għal tipi differenti ta’ ċelloli. Il-portafoll jinkludi firxa ta’ tubi kif ukoll firxa ta’ krijovials sterili.

Il-krijovials tagħna huma:

• Tapp bil-Kamin tal-Laboratorju 0.5mL 1.5mL 2.0mL Kunjetti Krijoġeniċi Cryovial Cryotube b'Qiegħ Koniku b'Gasket

  ● Speċifikazzjoni ta' 0.5ml, 1.5ml, 2.0ml, bi dbielet jew mingħajr dbielet
  ● Disinn koniku jew wieqaf waħdu, sterili jew mhux sterili huma t-tnejn disponibbli
  ● It-tubi tal-għatu bil-kamin huma magħmula minn polipropilene ta' grad mediku
  ● Il-kunjetti tal-PP Cryotube jistgħu jiġu ffriżati u mdewba ripetutament
  ●Id-disinn tal-għatu estern jista' jnaqqas il-probabbiltà ta' kontaminazzjoni waqt it-trattament tal-kampjun.
  ● Tubi krijoġeniċi b'tapp bil-kamin Ħjut bil-kamin universali għall-użu
  ● It-tubi jaqblu mal-biċċa l-kbira tar-rotors komuni
  ● Tubi krijoġeniċi b'o-ring jaqblu ma' kaxxi tal-friża standard ta' pulzier u 2 pulzieri, 48-il bjar, 81-il bjar, 96-il bjar u 100 bjar
  ● Awtoklavabbli sa 121°C u ffriżabbli sa -86°C

  NUMRU TAL-PARTI	MATERJAL	VOLUM	KAPKULUR	PCS/BORSA	BOROZ/KAXXA
  ACT05-BL-N	PP	0.5ML	Iswed, Isfar, Blu, Aħmar, Vjola, Abjad	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ML	Iswed, Isfar, Blu, Aħmar, Vjola, Abjad	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ML	Iswed, Isfar, Blu, Aħmar, Vjola, Abjad	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	Iswed, Isfar, Blu, Aħmar, Vjola, Abjad	500	10