کریوویئلزعام طور پر مائع نائٹروجن سے بھرے دیواروں میں سیل لائنوں اور دیگر اہم حیاتیاتی مواد کے کرائیوجینک ذخیرہ کرنے کے لیے استعمال ہوتے ہیں۔

مائع نائٹروجن میں خلیات کے کامیاب تحفظ میں کئی مراحل شامل ہیں۔جب کہ بنیادی اصول ایک سست منجمد ہے، استعمال کی جانے والی درست تکنیک کا انحصار سیل کی قسم اور استعمال شدہ کریوپروٹیکنٹ پر ہوتا ہے۔اس طرح کے کم درجہ حرارت پر خلیات کو ذخیرہ کرتے وقت کئی حفاظتی تحفظات اور بہترین طریقوں کو مدنظر رکھنا ضروری ہے۔

اس پوسٹ کا مقصد اس بات کا جائزہ دینا ہے کہ مائع نائٹروجن میں کریووئلز کو کیسے ذخیرہ کیا جاتا ہے۔

Cryovials کیا ہیں؟

Cryovials چھوٹی، ڈھکی ہوئی شیشیاں ہیں جو انتہائی کم درجہ حرارت پر مائع کے نمونوں کو ذخیرہ کرنے کے لیے ڈیزائن کی گئی ہیں۔وہ اس بات کو یقینی بناتے ہیں کہ cryoprotectant میں محفوظ خلیات مائع نائٹروجن کے ساتھ براہ راست رابطے میں نہیں آتے ہیں، سیلولر فریکچر کے خطرے کو کم کرتے ہیں جب کہ مائع نائٹروجن کے انتہائی ٹھنڈک اثر سے فائدہ اٹھاتے ہیں۔

شیشی عام طور پر حجم اور ڈیزائن کی ایک رینج میں دستیاب ہوتی ہیں - وہ اندرونی یا بیرونی طور پر فلیٹ یا گول بوتلوں کے ساتھ تھریڈڈ ہو سکتی ہیں۔جراثیم سے پاک اور غیر جراثیم سے پاک فارمیٹس بھی دستیاب ہیں۔

کون استعمال کرتا ہے۔سائرووئلزمائع نائٹروجن میں خلیات کو ذخیرہ کرنے کے لئے

NHS اور پرائیویٹ لیبارٹریوں کی ایک رینج، نیز تحقیقی ادارے جو ہڈیوں کے بلڈ بینکنگ، اپیتھیلیل سیل بائیولوجی، امیونولوجی اور اسٹیم سیل بائیولوجی میں مہارت رکھتے ہیں، خلیات کو محفوظ کرنے کے لیے کریوویئلز کا استعمال کرتے ہیں۔

اس طرح سے محفوظ کیے جانے والے خلیوں میں B اور T سیلز، CHO سیلز، Hematopoietic Stem اور Progenitor Cells، Hybridomas، Intestinal Cells، Macrophages، Mesenchymal Stem اور Progenitor Cells، Monocytes، Myeloma، NK Cells اور Pluripotent Stem Cells شامل ہیں۔

مائع نائٹروجن میں Cryovials کو کیسے ذخیرہ کیا جائے اس کا جائزہ

Cryopreservation ایک ایسا عمل ہے جو خلیات اور دیگر حیاتیاتی تعمیرات کو بہت کم درجہ حرارت پر ٹھنڈا کر کے محفوظ رکھتا ہے۔خلیوں کو سال کے لیے مائع نائٹروجن میں ذخیرہ کیا جا سکتا ہے بغیر سیل کی قابل عملیت کے نقصان کے۔یہ استعمال کیے گئے طریقہ کار کا خاکہ ہے۔

سیل کی تیاری

نمونے تیار کرنے کا صحیح طریقہ سیل کی قسم کے لحاظ سے مختلف ہوگا، لیکن عام طور پر، خلیات کو جمع کیا جاتا ہے اور سیل سے بھرپور گولی تیار کرنے کے لیے سینٹرفیوج کیا جاتا ہے۔اس گولی کو پھر سپرنٹنٹ میں کرائیو پروٹیکٹنٹ یا کرائیو پریزرویشن میڈیم کے ساتھ ملایا جاتا ہے۔

Cryopreservation میڈیم

اس میڈیم کو کم درجہ حرارت والے ماحول میں خلیات کو محفوظ رکھنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے جس کے تحت وہ انٹرا اور ایکسٹرا سیلولر کرسٹل کی تشکیل کو روکتے ہیں اور اس وجہ سے سیل کی موت ہوتی ہے۔ان کا کردار منجمد، ذخیرہ کرنے اور پگھلنے کے عمل کے دوران خلیوں اور بافتوں کے لیے ایک محفوظ، حفاظتی ماحول فراہم کرنا ہے۔

ایک میڈیم جیسے تازہ منجمد پلازما (FFP)، ہیپرینائزڈ پلازما لائٹ محلول یا سیرم سے پاک، جانوروں کے اجزاء سے پاک محلول کو ڈائمتھائل سلفوکسائیڈ (DMSO) یا گلیسرول جیسے cryoprotectants کے ساتھ ملایا جاتا ہے۔

دوبارہ مائع شدہ نمونے کی گولی کو پولی پروپیلین کریوویئلز میں الگ کیا جاتا ہے جیسےSuzhou Ace بایومیڈیکل کمپنی Cryogenic Storage Vials.

یہ ضروری ہے کہ کرائیوئلز کو زیادہ نہ بھریں کیونکہ اس سے کریکنگ اور مواد کے ممکنہ ریلیز ہونے کا خطرہ بڑھ جائے گا (1)۔

کنٹرول شدہ منجمد شرح

عام طور پر، خلیات کی کامیاب کرائیو پریزرویشن کے لیے ایک سست کنٹرول شدہ منجمد شرح کا استعمال کیا جاتا ہے۔

نمونوں کو کرائیوجینک شیشیوں میں الگ کرنے کے بعد، انہیں گیلی برف پر یا 4℃ ریفریجریٹر میں رکھا جاتا ہے اور منجمد کرنے کا عمل 5 منٹ کے اندر شروع کر دیا جاتا ہے۔ایک عام رہنما کے طور پر، خلیات کو -1 سے -3 فی منٹ (2) کی شرح سے ٹھنڈا کیا جاتا ہے۔یہ قابل پروگرام کولر کا استعمال کرتے ہوئے یا -70 ° C سے -90 ° C کنٹرول شدہ ریٹ فریزر میں رکھے ہوئے ایک موصل باکس میں شیشیوں کو رکھ کر حاصل کیا جاتا ہے۔

مائع نائٹروجن میں منتقل کریں۔

اس کے بعد منجمد کرائیوجینک شیشیوں کو غیر معینہ مدت کے لیے مائع نائٹروجن ٹینک میں منتقل کیا جاتا ہے بشرطیکہ درجہ حرارت -135℃ سے کم برقرار رہے۔

یہ انتہائی کم درجہ حرارت مائع یا بخارات کے مرحلے نائٹروجن میں ڈوب کر حاصل کیے جا سکتے ہیں۔

مائع یا بخارات کا مرحلہ؟

مائع مرحلے میں نائٹروجن کا ذخیرہ ٹھنڈے درجہ حرارت کو مطلق مستقل مزاجی کے ساتھ برقرار رکھنے کے لیے جانا جاتا ہے، لیکن اکثر درج ذیل وجوہات کی بنا پر اس کی سفارش نہیں کی جاتی ہے۔

• مائع نائٹروجن کی بڑی مقدار (گہرائی) کی ضرورت جو ایک ممکنہ خطرہ ہے۔اس کی وجہ سے جلنا یا دم گھٹنا ایک حقیقی خطرہ ہے۔
• متعدی ایجنٹوں جیسے ایسپرگیلس، ہیپ بی اور مائع نائٹروجن میڈیم (2,3) کے ذریعے پھیلنے والے وائرس کے ذریعے کراس آلودگی کے دستاویزی کیسز
• وسرجن کے دوران شیشیوں میں مائع نائٹروجن کے رسنے کا امکان۔جب سٹوریج سے ہٹا کر کمرے کے درجہ حرارت پر گرم کیا جاتا ہے، نائٹروجن تیزی سے پھیلتی ہے۔نتیجتاً، مائع نائٹروجن اسٹوریج سے ہٹانے پر شیشی بکھر سکتی ہے، جس سے اڑنے والے ملبے اور مواد کی نمائش دونوں سے خطرہ پیدا ہو سکتا ہے (1, 4)۔

ان وجوہات کی بناء پر، انتہائی کم درجہ حرارت کا ذخیرہ زیادہ تر بخارات کے مرحلے میں نائٹروجن میں ہوتا ہے۔جب نمونوں کو مائع مرحلے میں ذخیرہ کرنا ضروری ہے تو، خصوصی کرائیو فلیکس نلیاں استعمال کی جانی چاہئیں۔

بخارات کے مرحلے کا منفی پہلو یہ ہے کہ عمودی درجہ حرارت کا میلان -135℃ اور -190℃ کے درمیان درجہ حرارت کے اتار چڑھاو کے نتیجے میں ہو سکتا ہے۔اس کے لیے مائع نائٹروجن کی سطح اور درجہ حرارت کے تغیرات کی محتاط اور مستعد نگرانی کی ضرورت ہوتی ہے (5)۔

بہت سے مینوفیکچررز تجویز کرتے ہیں کہ کریوویئلز -135℃ تک ذخیرہ کرنے کے لیے یا صرف بخارات کے مرحلے میں استعمال کے لیے موزوں ہیں۔

اپنے Cryopreserved سیلز کو پگھلانا

پگھلنے کا طریقہ کار منجمد ثقافت کے لیے دباؤ کا باعث ہے، اور خلیات کی بہترین عملداری، بحالی اور فعالیت کو یقینی بنانے کے لیے مناسب ہینڈلنگ اور تکنیک کی ضرورت ہے۔بالکل پگھلنے کے پروٹوکول کا انحصار سیل کی مخصوص اقسام پر ہوگا۔تاہم، تیزی سے پگھلنے کو معیاری سمجھا جاتا ہے:

• سیلولر بحالی پر کسی بھی اثر کو کم کریں۔
• منجمد میڈیا میں موجود محلولوں کی نمائش کے وقت کو کم کرنے میں مدد کریں۔
• آئس ری کرسٹلائزیشن کے ذریعے کسی بھی نقصان کو کم سے کم کریں۔

پانی کے غسل، مالا کے غسل، یا خصوصی خودکار آلات عام طور پر نمونوں کو پگھلانے کے لیے استعمال ہوتے ہیں۔

اکثر 1 سیل لائن کو ایک وقت میں 1-2 منٹ کے لیے پگھلا دیا جاتا ہے، 37 ℃ پانی کے غسل میں آہستہ سے گھومنے سے جب تک کہ شیشی میں تھوڑی سی برف باقی نہ رہ جائے اس سے پہلے کہ وہ پہلے سے گرم گروتھ میڈیم میں دھوئے جائیں۔

کچھ خلیات جیسے ممالیہ جنین کے لیے، ان کی بقا کے لیے آہستہ گرمی ضروری ہے۔

خلیے اب سیل کلچر، سیل آئسولیشن، یا ہیماٹوپوائٹک اسٹیم سیلز کی صورت میں تیار ہیں - مائیلو ایبلٹیو تھراپی سے پہلے ڈونر اسٹیم سیلز کی سالمیت کی ضمانت کے لیے قابل عمل مطالعہ۔

کلچر میں چڑھانے کے لیے سیل کی تعداد کا تعین کرنے کے لیے سیل کی گنتی کو انجام دینے کے لیے پہلے سے دھوئے گئے نمونے کے چھوٹے ایلی کوٹس لینا معمول کی بات ہے۔اس کے بعد آپ سیل الگ تھلگ کرنے کے طریقہ کار کے نتائج کا اندازہ لگا سکتے ہیں اور سیل کی قابل عملیت کا تعین کر سکتے ہیں۔

Cryovials کے ذخیرہ کرنے کے بہترین طریقے

cryovials میں ذخیرہ شدہ نمونوں کی کامیاب cryopreservation کا انحصار پروٹوکول کے بہت سے عناصر پر ہوتا ہے جس میں مناسب اسٹوریج اور ریکارڈ رکھنا شامل ہے۔

• سٹوریج کے مقامات کے درمیان سیل تقسیم کریں- اگر حجم اجازت دیتا ہے تو، شیشیوں کے درمیان سیل تقسیم کریں اور انہیں الگ الگ جگہوں پر ذخیرہ کریں تاکہ سامان کی خرابی کی وجہ سے نمونے کے ضائع ہونے کے خطرے کو کم کیا جا سکے۔
• کراس آلودگی کو روکیں۔- بعد میں استعمال کرنے سے پہلے واحد استعمال جراثیم سے پاک کریوجینک شیشیوں یا آٹوکلیو کا انتخاب کریں۔
• اپنے خلیوں کے لیے مناسب سائز کی شیشیوں کا استعمال کریں۔- شیشیاں 1 اور 5mls کے درمیان حجم کی ایک رینج میں آتی ہیں۔ٹوٹنے کے خطرے کو کم کرنے کے لیے شیشیوں کو زیادہ بھرنے سے گریز کریں۔
• اندرونی یا بیرونی دھاگے والی کریوجینک شیشیوں کا انتخاب کریں۔کچھ یونیورسٹیوں کی طرف سے حفاظتی اقدامات کے لیے اندرونی طور پر تھریڈڈ شیشیوں کی سفارش کی جاتی ہے - یہ بھرنے کے دوران یا مائع نائٹروجن میں ذخیرہ ہونے پر بھی آلودگی کو روک سکتی ہیں۔
• رساو کو روکیں۔- اخراج اور آلودگی کو روکنے کے لیے سکرو کیپ یا O-rings میں ڈھالے ہوئے دو انجکشن والی مہروں کا استعمال کریں۔
• 2D بارکوڈز اور لیبل شیشیوں کا استعمال کریں۔- ٹریس ایبلٹی کو یقینی بنانے کے لیے، بڑی تحریری جگہوں والی شیشییں ہر شیشی کو مناسب لیبل لگانے کے قابل بناتی ہیں۔2D بارکوڈز سٹوریج کے انتظام اور ریکارڈ رکھنے میں مدد کر سکتے ہیں۔آسانی سے شناخت کے لیے کلر کوڈڈ کیپس مفید ہیں۔
• مناسب اسٹوریج کی دیکھ بھال- یہ یقینی بنانے کے لیے کہ خلیات ضائع نہ ہوں، ذخیرہ کرنے والے برتنوں کو درجہ حرارت اور مائع نائٹروجن کی سطح کی مسلسل نگرانی کرنی چاہیے۔صارفین کو غلطیوں سے آگاہ کرنے کے لیے الارم لگائے جائیں۔

احتیاطی تدابیر

مائع نائٹروجن جدید تحقیق میں عام رواج بن گیا ہے لیکن اگر غلط طریقے سے استعمال کیا جائے تو سنگین چوٹ کا خطرہ ہوتا ہے۔

مائع نائٹروجن کو سنبھالتے وقت فراسٹ بائٹ، جلنے اور دیگر منفی واقعات کے خطرے کو کم کرنے کے لیے مناسب ذاتی حفاظتی سامان (پی پی ای) پہننا چاہیے۔پہننا

• کریوجینک دستانے
• لیبارٹری کوٹ
• امپیکٹ ریزسٹنٹ فل فیس شیلڈ جو گردن کو بھی ڈھانپتی ہے۔
• بند پیر کے جوتے
• سپلیش پروف پلاسٹک کا تہبند

مائع نائٹروجن ریفریجریٹرز کو ہوادار جگہوں پر رکھا جانا چاہیے تاکہ دم گھٹنے کے خطرے کو کم سے کم کیا جا سکے۔بڑے حجم والے اسٹورز میں کم آکسیجن الارم سسٹم ہونا چاہیے۔

مائع نائٹروجن کو سنبھالتے وقت جوڑوں میں کام کرنا مثالی ہے اور اس کا استعمال عام کام کے اوقات سے باہر ممنوع ہونا چاہیے۔

آپ کے ورک فلو کو سپورٹ کرنے کے لیے Cryovials

Suzhou Ace بایومیڈیکل کمپنی پروڈکٹس کا ایک وسیع انتخاب پیش کرتی ہے جو مختلف قسم کے خلیوں کے لیے آپ کی cryopreservation کی ضروریات کو پورا کرتی ہے۔پورٹ فولیو میں ٹیوبوں کی ایک رینج کے ساتھ ساتھ جراثیم سے پاک کریوویئلز کی ایک رینج بھی شامل ہے۔

ہمارے cryovials ہیں:

• لیب سکرو کیپ 0.5mL 1.5mL 2.0mL Cryovial Cryogenic Vials Conical Botom Cryotube with Gasket

  ● 0.5ml، 1.5ml، 2.0ml تفصیلات، سکرٹ کے ساتھ یا اسکرٹ کے بغیر
  ● مخروطی یا خود کھڑے ڈیزائن، جراثیم سے پاک یا غیر جراثیم سے پاک دونوں دستیاب ہیں۔
  ● سکرو کیپ ٹیوبیں میڈیکل گریڈ پولی پروپیلین سے بنی ہیں۔
  ● PP Cryotube Vials کو بار بار منجمد اور پگھلایا جا سکتا ہے۔
  ● بیرونی ٹوپی ڈیزائن نمونے کے علاج کے دوران آلودگی کے امکان کو کم کر سکتا ہے۔
  ● سکرو کیپ کریوجینک ٹیوبیں یونیورسل سکرو تھریڈز استعمال کے لیے
  ● نلیاں سب سے عام روٹرز پر فٹ ہوتی ہیں۔
  ● کریوجینک ٹیوب او-رنگ ٹیوبیں معیاری 1 انچ اور 2 انچ، 48 ویل، 81 ویل， 96 کنواں اور 100 کنواں فریزر باکس میں فٹ ہوتی ہیں
  ● 121°C تک آٹوکلیو ایبل اور -86°C پر منجمد

  حصہ نمبر	مواد	حجم	CAPرنگ	پی سی ایس/بیگ	بیگز/کیس
  ACT05-BL-N	PP	0.5ML	سیاہ، پیلا، نیلا، سرخ، جامنی، سفید	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ML	سیاہ، پیلا، نیلا، سرخ، جامنی، سفید	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ML	سیاہ، پیلا، نیلا، سرخ، جامنی، سفید	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	سیاہ، پیلا، نیلا، سرخ، جامنی، سفید	500	10