cryovialsआमतौर पर तरल नाइट्रोजन से भरे देवरों में सेल लाइनों और अन्य महत्वपूर्ण जैविक सामग्रियों के क्रायोजेनिक भंडारण के लिए उपयोग किया जाता है।

तरल नाइट्रोजन में कोशिकाओं के सफल संरक्षण में कई चरण शामिल हैं।जबकि मूल सिद्धांत धीमी गति से फ्रीज करना है, नियोजित सटीक तकनीक सेल प्रकार और उपयोग किए गए क्रायोप्रोटेक्टेंट पर निर्भर करती है।इतने कम तापमान पर कोशिकाओं का भंडारण करते समय कई सुरक्षा संबंधी बातों और सर्वोत्तम प्रथाओं को ध्यान में रखना होता है।

इस पोस्ट का उद्देश्य यह अवलोकन देना है कि क्रायोवियल को तरल नाइट्रोजन में कैसे संग्रहित किया जाता है।

क्रायोवियल क्या हैं

क्रायोवियल छोटी, ढकी हुई शीशियाँ होती हैं जिन्हें बेहद कम तापमान पर तरल नमूनों को संग्रहीत करने के लिए डिज़ाइन किया गया है।वे सुनिश्चित करते हैं कि क्रायोप्रोटेक्टेंट में संरक्षित कोशिकाएं तरल नाइट्रोजन के सीधे संपर्क में नहीं आती हैं, जिससे सेलुलर फ्रैक्चर का खतरा कम हो जाता है जबकि तरल नाइट्रोजन के अत्यधिक शीतलन प्रभाव से लाभ होता है।

शीशियाँ आमतौर पर कई प्रकार की मात्राओं और डिज़ाइनों में उपलब्ध होती हैं - उन्हें आंतरिक या बाहरी रूप से सपाट या गोल तली के साथ पिरोया जा सकता है।स्टेराइल और नॉन-स्टेराइल प्रारूप भी उपलब्ध हैं।

कौन उपयोग करता हैcryovialsकोशिकाओं को तरल नाइट्रोजन में संग्रहित करना

एनएचएस और निजी प्रयोगशालाओं की एक श्रृंखला, साथ ही कॉर्ड ब्लड बैंकिंग, एपिथेलियल सेल बायोलॉजी, इम्यूनोलॉजी और स्टेम सेल बायोलॉजी में विशेषज्ञता वाले अनुसंधान संस्थान क्रायोप्रिजर्व कोशिकाओं के लिए क्रायोवियल का उपयोग करते हैं।

इस तरह से संरक्षित कोशिकाओं में बी और टी कोशिकाएं, सीएचओ कोशिकाएं, हेमेटोपोएटिक स्टेम और पूर्वज कोशिकाएं, हाइब्रिडोमास, आंत कोशिकाएं, मैक्रोफेज, मेसेनकाइमल स्टेम और पूर्वज कोशिकाएं, मोनोसाइट्स, मायलोमा, एनके कोशिकाएं और प्लुरिपोटेंट स्टेम कोशिकाएं शामिल हैं।

तरल नाइट्रोजन में क्रायोवियल्स को कैसे स्टोर करें का अवलोकन

क्रायोप्रिजर्वेशन एक ऐसी प्रक्रिया है जो कोशिकाओं और अन्य जैविक संरचनाओं को बहुत कम तापमान पर ठंडा करके संरक्षित करती है।कोशिकाओं को कोशिका व्यवहार्यता के नुकसान के बिना वर्षों तक तरल नाइट्रोजन में संग्रहीत किया जा सकता है।यह नियोजित प्रक्रियाओं की एक रूपरेखा है।

सेल तैयारी

नमूने तैयार करने की सटीक विधि कोशिका प्रकार के आधार पर अलग-अलग होगी, लेकिन सामान्य तौर पर, कोशिका-समृद्ध गोली विकसित करने के लिए कोशिकाओं को एकत्र किया जाता है और सेंट्रीफ्यूज किया जाता है।फिर इस गोली को क्रायोप्रोटेक्टेंट या क्रायोप्रिजर्वेशन माध्यम के साथ मिश्रित सतह पर तैरनेवाला में फिर से निलंबित कर दिया जाता है।

क्रायोप्रिजर्वेशन माध्यम

इस माध्यम का उपयोग कम तापमान वाले वातावरण में कोशिकाओं को संरक्षित करने के लिए किया जाता है, जिसके अधीन वे इंट्रा और एक्स्ट्रासेलुलर क्रिस्टल के गठन को रोकेंगे और इसलिए कोशिका मृत्यु होगी।उनकी भूमिका ठंड, भंडारण और पिघलने की प्रक्रियाओं के दौरान कोशिकाओं और ऊतकों के लिए एक सुरक्षित, सुरक्षात्मक वातावरण प्रदान करना है।

ताजा जमे हुए प्लाज़्मा (एफएफपी), हेपरिनिज़्ड प्लाज़्मालाइट समाधान या सीरम-मुक्त, पशु घटक-मुक्त समाधान जैसे माध्यम को डाइमिथाइल सल्फ़ोक्साइड (डीएमएसओ) या ग्लिसरॉल जैसे क्रायोप्रोटेक्टेंट्स के साथ मिलाया जाता है।

पुन: द्रवीकृत नमूना गोली को पॉलीप्रोपाइलीन क्रायोवियल जैसे में विभाजित किया जाता हैसूज़ौ ऐस बायोमेडिकल कंपनी क्रायोजेनिक स्टोरेज शीशियाँ.

यह महत्वपूर्ण है कि क्रायोवियल्स को अधिक न भरें क्योंकि इससे दरार पड़ने और सामग्री के संभावित रूप से निकलने का खतरा बढ़ जाएगा (1)।

नियंत्रित फ्रीज दर

सामान्य तौर पर, कोशिकाओं के सफल क्रायोप्रिजर्वेशन के लिए धीमी नियंत्रित फ्रीज दर को नियोजित किया जाता है।

नमूनों को क्रायोजेनिक शीशियों में डालने के बाद, उन्हें गीली बर्फ पर या 4℃ रेफ्रिजरेटर में रखा जाता है और 5 मिनट के भीतर जमने की प्रक्रिया शुरू हो जाती है।एक सामान्य दिशानिर्देश के रूप में, कोशिकाओं को -1 से -3 प्रति मिनट (2) की दर से ठंडा किया जाता है।यह एक प्रोग्रामयोग्य कूलर का उपयोग करके या -70 डिग्री सेल्सियस से -90 डिग्री सेल्सियस नियंत्रित दर फ्रीजर में रखे गए एक इंसुलेटेड बॉक्स में शीशियों को रखकर हासिल किया जाता है।

तरल नाइट्रोजन में स्थानांतरण

जमे हुए क्रायोजेनिक शीशियों को अनिश्चित काल के लिए तरल नाइट्रोजन टैंक में स्थानांतरित कर दिया जाता है, बशर्ते तापमान -135℃ से कम बनाए रखा जाए।

ये अति-निम्न तापमान तरल या वाष्प चरण नाइट्रोजन में विसर्जन द्वारा प्राप्त किया जा सकता है।

तरल या वाष्प चरण?

तरल चरण नाइट्रोजन में भंडारण पूर्ण स्थिरता के साथ ठंडे तापमान को बनाए रखने के लिए जाना जाता है, लेकिन अक्सर निम्नलिखित कारणों से इसकी अनुशंसा नहीं की जाती है:

• तरल नाइट्रोजन की बड़ी मात्रा (गहराई) की आवश्यकता जो एक संभावित खतरा है।इसके कारण जलन या दम घुटना एक वास्तविक जोखिम है।
• एस्परगिलस, हेप बी और वायरल जैसे संक्रामक एजेंटों द्वारा क्रॉस-संदूषण के दस्तावेजी मामले तरल नाइट्रोजन माध्यम से फैलते हैं (2,3)
• विसर्जन के दौरान तरल नाइट्रोजन के शीशियों में लीक होने की संभावना।जब भंडारण से निकाला जाता है और कमरे के तापमान पर गर्म किया जाता है, तो नाइट्रोजन तेजी से फैलती है।नतीजतन, तरल नाइट्रोजन भंडारण से हटाए जाने पर शीशी टूट सकती है, जिससे उड़ने वाले मलबे और सामग्री के संपर्क में आने से खतरा पैदा हो सकता है (1, 4)।

इन कारणों से, अति-निम्न तापमान भंडारण आमतौर पर वाष्प चरण नाइट्रोजन में होता है।जब नमूनों को तरल चरण में संग्रहीत किया जाना चाहिए, तो विशेष क्रायोफ्लेक्स टयूबिंग का उपयोग किया जाना चाहिए।

वाष्प चरण का नकारात्मक पक्ष यह है कि ऊर्ध्वाधर तापमान प्रवणता उत्पन्न हो सकती है जिसके परिणामस्वरूप -135℃ और -190℃ के बीच तापमान में उतार-चढ़ाव हो सकता है।इसके लिए तरल नाइट्रोजन के स्तर और तापमान भिन्नता (5) की सावधानीपूर्वक और मेहनती निगरानी की आवश्यकता होती है।

कई निर्माता सलाह देते हैं कि क्रायोवियल -135℃ तक भंडारण के लिए या केवल वाष्प चरण में उपयोग के लिए उपयुक्त हैं।

आपकी क्रायोप्रिजर्व्ड कोशिकाओं को पिघलाना

जमे हुए संस्कृति के लिए विगलन प्रक्रिया तनावपूर्ण है, और कोशिकाओं की इष्टतम व्यवहार्यता, पुनर्प्राप्ति और कार्यक्षमता सुनिश्चित करने के लिए उचित संचालन और तकनीक की आवश्यकता होती है।सटीक विगलन प्रोटोकॉल विशिष्ट सेल प्रकारों पर निर्भर करेगा।हालाँकि, तेजी से पिघलना मानक माना जाता है:

• सेलुलर पुनर्प्राप्ति पर किसी भी प्रभाव को कम करें
• फ़्रीज़िंग मीडिया में मौजूद विलेय के संपर्क के समय को कम करने में मदद करें
• बर्फ के पुनः क्रिस्टलीकरण द्वारा किसी भी क्षति को कम करें

नमूनों को पिघलाने के लिए आमतौर पर जल स्नान, मनका स्नान या विशेष स्वचालित उपकरणों का उपयोग किया जाता है।

अक्सर 1 सेल लाइन को 37℃ पानी के स्नान में धीरे-धीरे घुमाकर 1-2 मिनट के लिए पिघलाया जाता है, जब तक कि शीशी में बर्फ का एक छोटा सा हिस्सा न रह जाए, इससे पहले कि उन्हें पहले से गर्म विकास माध्यम में धोया जाए।

स्तनधारी भ्रूण जैसी कुछ कोशिकाओं के जीवित रहने के लिए धीमी गति से गर्म होना आवश्यक है।

कोशिकाएँ अब कोशिका संवर्धन, कोशिका अलगाव, या हेमेटोपोएटिक स्टेम कोशिकाओं के मामले में - मायलोब्लेटिव थेरेपी से पहले दाता स्टेम कोशिकाओं की अखंडता की गारंटी के लिए व्यवहार्यता अध्ययन के लिए तैयार हैं।

कल्चर में प्लेटिंग के लिए सेल सांद्रता निर्धारित करने के लिए सेल गिनती करने के लिए उपयोग किए जाने वाले पूर्व-धोए गए नमूने के छोटे अंश लेना सामान्य अभ्यास है।फिर आप सेल अलगाव प्रक्रियाओं के परिणामों का आकलन कर सकते हैं और सेल व्यवहार्यता निर्धारित कर सकते हैं।

क्रायोवियल्स के भंडारण के लिए सर्वोत्तम अभ्यास

क्रायोवियल में संग्रहीत नमूनों का सफल क्रायोप्रिजर्वेशन उचित भंडारण और रिकॉर्ड रखने सहित प्रोटोकॉल में कई तत्वों पर निर्भर करता है।

• भंडारण स्थानों के बीच कोशिकाओं को विभाजित करें- यदि मात्रा अनुमति देती है, तो उपकरण विफलताओं के कारण नमूना हानि के जोखिम को कम करने के लिए कोशिकाओं को शीशियों के बीच विभाजित करें और उन्हें अलग-अलग स्थानों पर संग्रहीत करें।
• क्रॉस-संदूषण को रोकें- बाद के उपयोग से पहले एकल-उपयोग बाँझ क्रायोजेनिक शीशियों या आटोक्लेव का विकल्प चुनें
• अपनी कोशिकाओं के लिए उचित आकार की शीशियों का उपयोग करें- शीशियाँ 1 से 5 मिलीलीटर के बीच की मात्रा में आती हैं।टूटने के जोखिम को कम करने के लिए शीशियों को अधिक भरने से बचें।
• आंतरिक या बाहरी रूप से थ्रेडेड क्रायोजेनिक शीशियों का चयन करें- सुरक्षा उपायों के लिए कुछ विश्वविद्यालयों द्वारा आंतरिक रूप से थ्रेडेड शीशियों की सिफारिश की जाती है - वे भरने के दौरान या तरल नाइट्रोजन में संग्रहीत होने पर संदूषण को भी रोक सकते हैं।
• रिसाव रोकें- लीक और संदूषण को रोकने के लिए स्क्रू-कैप या ओ-रिंग्स में ढाले गए द्वि-इंजेक्टेड सील का उपयोग करें।
• 2डी बारकोड और लेबल शीशियों का उपयोग करें- पता लगाने की क्षमता सुनिश्चित करने के लिए, बड़े लेखन क्षेत्रों वाली शीशियाँ प्रत्येक शीशी को पर्याप्त रूप से लेबल करने में सक्षम बनाती हैं।2डी बारकोड भंडारण प्रबंधन और रिकॉर्ड रखने में मदद कर सकते हैं।रंग कोडित टोपियां आसान पहचान के लिए उपयोगी होती हैं।
• पर्याप्त भंडारण रखरखाव- यह सुनिश्चित करने के लिए कि कोशिकाएं नष्ट न हों, भंडारण जहाजों को तापमान और तरल नाइट्रोजन के स्तर की लगातार निगरानी करनी चाहिए।उपयोगकर्ताओं को त्रुटियों के प्रति सचेत करने के लिए अलार्म लगाया जाना चाहिए।

सुरक्षा सावधानियां

आधुनिक शोध में तरल नाइट्रोजन आम चलन बन गया है लेकिन गलत तरीके से इस्तेमाल करने पर गंभीर चोट का खतरा रहता है।

तरल नाइट्रोजन को संभालते समय शीतदंश, जलने और अन्य प्रतिकूल घटनाओं के जोखिम को कम करने के लिए उचित व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण (पीपीई) पहना जाना चाहिए।घिसाव

• क्रायोजेनिक दस्ताने
• प्रयोगशाला कोट
• प्रभाव प्रतिरोधी पूर्ण चेहरा ढाल जो गर्दन को भी कवर करती है
• बंद पैर के जूते
• स्पलैशप्रूफ प्लास्टिक एप्रन

दम घुटने के जोखिम को कम करने के लिए तरल नाइट्रोजन रेफ्रिजरेटर को अच्छी तरह हवादार क्षेत्रों में रखा जाना चाहिए - बची हुई नाइट्रोजन वाष्पीकृत हो जाती है और वायुमंडलीय ऑक्सीजन को विस्थापित कर देती है।बड़ी मात्रा वाली दुकानों में कम ऑक्सीजन वाले अलार्म सिस्टम होने चाहिए।

तरल नाइट्रोजन को संभालते समय जोड़े में काम करना आदर्श है और सामान्य कामकाजी घंटों के बाहर इसका उपयोग निषिद्ध होना चाहिए।

आपके वर्कफ़्लो का समर्थन करने के लिए क्रायोविअल

सूज़ौ ऐस बायोमेडिकल कंपनी उत्पादों का एक विस्तृत चयन प्रदान करती है जो विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं के लिए आपकी क्रायोप्रिजर्वेशन आवश्यकताओं को पूरा करती है।पोर्टफोलियो में ट्यूबों की एक श्रृंखला के साथ-साथ बाँझ क्रायोवियल की एक श्रृंखला भी शामिल है।

हमारे क्रायोवियल हैं:

• लैब स्क्रू कैप 0.5 एमएल 1.5 एमएल 2.0 एमएल क्रायोवियल क्रायोजेनिक शीशियां गैस्केट के साथ शंक्वाकार बॉटम क्रायोट्यूब

  ● 0.5 मिली, 1.5 मिली, 2.0 मिली विशिष्टता, स्कर्ट के साथ या बिना स्कर्ट के
  ● शंक्वाकार या स्व-खड़े डिज़ाइन, बाँझ या गैर-बाँझ दोनों उपलब्ध हैं
  ● स्क्रू कैप ट्यूब मेडिकल ग्रेड पॉलीप्रोपाइलीन से बने होते हैं
  ● पीपी क्रायोट्यूब शीशियों को बार-बार जमाया और पिघलाया जा सकता है
  ●बाहरी टोपी का डिज़ाइन नमूना उपचार के दौरान संदूषण की संभावना को कम कर सकता है।
  ● स्क्रू कैप क्रायोजेनिक ट्यूब उपयोग के लिए यूनिवर्सल स्क्रू धागे
  ● ट्यूब सबसे आम रोटार में फिट होते हैं
  ● क्रायोजेनिक ट्यूब ओ-रिंग ट्यूब मानक 1-इंच और 2-इंच, 48वेल, 81वेल, 96वेल और 100वेल फ्रीजर बक्से में फिट होते हैं।
  ● 121°C तक ऑटोक्लेवेबल और -86°C तक फ्रीजेबल

  भाग संख्या	सामग्री	आयतन	टोपीरंग	पीसीएस/थैला	बैग/केस
  ACT05-बीएल-एन	PP	0.5 एमएल	काला, पीला, नीला, लाल, बैंगनी, सफेद	500	10
  ACT15-बीएल-एन	PP	1.5 एमएल	काला, पीला, नीला, लाल, बैंगनी, सफेद	500	10
  ACT15-बीएल-एनडब्ल्यू	PP	1.5 एमएल	काला, पीला, नीला, लाल, बैंगनी, सफेद	500	10
  ACT20-बीएल-एन	PP	2.0 एमएल	काला, पीला, नीला, लाल, बैंगनी, सफेद	500	10