Come sigillare una piastra PCR

Introduzione

Piastre PCR, un punto fermo del laboratorio per molti anni, stanno diventando sempre più diffusi nel contesto moderno, poiché i laboratori aumentano la loro produttività e utilizzano sempre più l'automazione nei loro flussi di lavoro. Raggiungere questi obiettivi preservando l'accuratezza e l'integrità degli esperimenti può essere difficile. Uno degli ambiti più comuni in cui possono insinuarsi errori è la sigillatura diPiastre PCR, con una tecnica scadente che consente l'evaporazione dei campioni, alterando il pH e quindi interrompendo le funzioni enzimatiche e favorendo la contaminazione. Imparare a sigillare unPiastra PCRelimina correttamente questi rischi e garantisce risultati riproducibili.

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Tappi a piastra vs. Sigilli a pellicola vs. Coperchi
CappelliniSono un ottimo modo per sigillare la piastra in modo ermetico, offrendoti comunque la flessibilità di aprirla e richiuderla facilmente secondo necessità, senza sprechi. Tuttavia, i tappi presentano un paio di svantaggi importanti.

Innanzitutto, dovrai acquistare il tappo specifico compatibile, il che li rende poco versatili. Dovrai assicurarti che il tappo scelto sia adatto alla piastra, il che dipende dal produttore, e scegliere tra un tappo bombato o uno piatto a seconda del termociclatore che stai utilizzando.

In secondo luogo, l'applicazione dei tappi sulla piastra può essere un'operazione molto ripetitiva e noiosa, con il rischio di contaminazione incrociata se si mette il tappo sbagliato sul pozzetto sbagliato.

Sebbene i sigilli in pellicola siano meno flessibili in termini di rimozione e sostituzione, sono molto versatili in quanto si adattano a qualsiasi tipo di piastra PCR, indipendentemente dal produttore. Possono essere semplicemente tagliati su misura, il che li rende molto efficaci.

Un'altra opzione è un coperchio a piastra. Questi offrono una protezione inferiore rispetto a tappi e sigilli e vengono utilizzati principalmente solo per una copertura temporanea, al fine di prevenire la contaminazione.

Sigilli ottici vs. in pellicola di alluminio

Che tu abbia bisogno di una guarnizione ottica e trasparente o di unpellicola di alluminiola sigillatura del piatto è decisa dal formato sperimentale.Pellicole sigillanti otticheSono trasparenti per consentire l'osservazione dei campioni, proteggendoli e prevenendone l'evaporazione. Sono inoltre particolarmente utili negli esperimenti di qPCR che prevedono misurazioni di fluorescenza ad alta precisione direttamente dalla piastra, nel qual caso è necessaria una pellicola sigillante che filtri la minor quantità possibile di fluorescenza. È importante assicurarsi che il sigillo o il tappo utilizzato abbia un livello di trasparenza ottica sufficientemente elevato da garantire letture accurate.

Le pellicole in alluminio sono adatte a campioni fotosensibili o da conservare a temperature inferiori a 80 °C. Per questo motivo, la maggior parte dei campioni destinati alla conservazione a lungo termine richiede una pellicola in alluminio. Le pellicole in alluminio sono anche perforabili, il che è utile sia per l'esame di singoli pozzetti, sia per il trasferimento dei campioni tramite aghi. Questa operazione può essere eseguita manualmente o tramite una piattaforma robotica.

Si tenga inoltre presente che le sostanze aggressive, tra cui acidi, basi o solventi, richiederanno una guarnizione in grado di resistervi, nel qual caso una guarnizione in lamina sarà probabilmente più appropriata.

Pellicola adesiva vs. pellicola termosaldante
Sigilli in pellicola adesivaSono molto semplici e facili da applicare. Tutto ciò che serve è applicare il sigillo alla piastra e utilizzare un semplice applicatore per premere e sigillare saldamente.

Le saldature a caldo sono più avanzate e offrono una tenuta più duratura con tassi di evaporazione ridotti rispetto a una saldatura adesiva convenzionale. Questa opzione è adatta se si desidera conservare i campioni a lungo termine, sebbene ciò comporti un requisito aggiuntivo per le apparecchiature di sigillatura delle piastre.

Come sigillare una piastra PCR

Metodo di sigillatura delle piastre

Autoadesivo

1. Assicurati di lavorare su una superficie di lavoro piana e stabile

2. Rimuovere la pellicola dalla confezione e rimuovere il supporto

3. Posizionare con attenzione il sigillo sulla piastra, assicurandosi che tutti i pozzetti siano coperti

4. Utilizzare un applicatore per esercitare pressione sulla piastra. Iniziare da un'estremità e procedere verso l'altra, premendo in modo uniforme.

5. Ripetere l'operazione più volte

6. Passare l'applicatore lungo i pozzetti esterni per accertarsi che siano sigillati correttamente.

Sigilli termici

Le saldature a caldo funzionano fondendo la pellicola sul bordo di ogni pozzetto, con l'aiuto di una saldatrice a piastra. Per utilizzare una saldatrice a caldo, consultare le istruzioni fornite dal produttore dell'apparecchiatura. Assicurarsi che il produttore da cui si acquista l'apparecchiatura sia affidabile, poiché è fondamentale che la saldatura sia adeguata, efficace e a tenuta stagna.

Suggerimenti per la sigillatura delle piastre

a. Quando si applica pressione alla guarnizione, procedere sia in direzione orizzontale che verticale per garantire una tenuta adeguata

b. È sempre buona norma eseguire una prova di qualsiasi cosa si stia facendo, e questo non è diverso con la sigillatura delle piastre. Eseguire una prova con una piastra vuota prima di utilizzarne una con i campioni.

c. Durante la prova, rimuovere il sigillo e verificare che l'adesivo aderisca correttamente, senza fessure. Una rappresentazione visiva di questo aspetto è disponibile nel primo documento di riferimento. Se la piastra non è stata sigillata correttamente, quando si rimuove il sigillo si noteranno delle fessure in cui l'adesivo non è completamente aderito alla piastra.

d. Per la spedizione e il trasporto dei campioni, potrebbe essere utile applicare un sigillo di plastica sopra il sigillo di alluminio per una maggiore protezione (soprattutto contro le forature).

e. Assicurarsi sempre che non ci siano urti o pieghe durante l'applicazione della pellicola: ciò causerebbe perdite ed evaporazione.