Hvernig á að innsigla PCR-plötu

Inngangur

PCR plötur, sem hafa verið undirstaða rannsóknarstofunnar í mörg ár, eru að verða enn algengari í nútímaumhverfi þar sem rannsóknarstofur auka afköst sín og nota í auknum mæli sjálfvirkni í vinnuflæði sínu. Að ná þessum markmiðum og varðveita nákvæmni og heilleika tilrauna getur verið erfitt. Eitt af algengustu sviðum þar sem villur geta laumast inn er við innsiglun áPCR plötur, með lélegri tækni sem gerir kleift að gufa upp sýni, breyta pH-gildi og þar með raska ensímstarfsemi og stuðla að mengun. Að læra að innsiglaPCR-plataútrýmir þessum áhættum á réttan hátt og tryggir endurtakanlegar niðurstöður.

Finndu rétta innsiglið fyrir PCR plötuna þína

Platalok vs. filmuþéttingar vs. lok
Húfureru góð leið til að innsigla diskinn þinn með þéttu innsigli, en samt sem áður gefa þér sveigjanleika til að opna og innsigla diskinn auðveldlega eftir þörfum án þess að sóa. Hins vegar hafa lok nokkra lykilgalla.

Í fyrsta lagi þarftu að kaupa sérstakt lokið sem er samhæft, sem gerir þau ekki fjölhæf. Þú þarft að ganga úr skugga um að lokið sem þú velur passi við plötuna, sem fer eftir framleiðanda hennar, og velja annað hvort kúplað eða flatt eftir því hvaða hitahringrásartæki þú notar.

Í öðru lagi getur það verið mjög endurtekið og tímafrekt að setja lokið á plötuna, með hættu á krossmengun ef rangt lokið er sett á rangan brunn.

Þótt filmuþéttingar séu ekki eins sveigjanlegar hvað varðar fjarlægingu og skiptingu, eru þær mjög fjölhæfar þar sem þær passa á allar gerðir af PCR-plötum, óháð framleiðanda. Þær er einfaldlega hægt að skera til í rétta stærð, sem gerir þær mjög áhrifaríkar.

Annar möguleiki er plötulok. Þetta veitir minni vörn en húfur og innsigli og er aðallega aðeins notað til skammtímahlífar til að koma í veg fyrir mengun.

Optískir vs. filmuþéttingar

Hvort sem þú þarft sjónræna, gegnsæja innsigli eðaálpappírsfilmaTilraunaformið þitt ákvarðar hvernig á að innsigla diskinn þinn.Sjónræn þéttifilmureru gegnsæ til að leyfa þér að skoða sýni, en vernda þau samt og koma í veg fyrir uppgufun. Þau eru einnig sérstaklega gagnleg í qPCR tilraunum sem fela í sér að gera mjög nákvæmar mælingar á flúrljómun beint af plötunni, en í því tilfelli þarftu þéttifilmu sem síar út eins litla flúrljómun og mögulegt er. Mikilvægt er að ganga úr skugga um að þéttingin eða lokið sem þú notar hafi nægilega mikla sjónræna skýrleika til að tryggja nákvæmar mælingar.

Álfilmur hentar vel fyrir öll sýni sem eru ljósnæm eða eiga að geyma við lægri hita en 80°C. Þess vegna þarfnast flest sýni sem ætluð eru til langtímageymslu álfilmu. Álfilmur eru einnig gatanlegar, sem er gagnlegt annað hvort til að skoða einstaka holur eða til að flytja sýni með nálum. Þetta getur gerst handvirkt eða sem hluti af vélmennastýrðum palli.

Hafðu einnig í huga að árásargjörn efni eins og sýrur, basar eða leysiefni þurfa þéttiefni sem þolir þau, og í því tilfelli er álþéttiefni líklega viðeigandi.

Lím vs. hitaþéttifilma
Límfilmuþéttingareru mjög einfaldar og auðveldar í notkun. Allt sem þú þarft er að notandinn setji innsiglið á plötuna og noti einfalt ásetningartól til að þrýsta niður og mynda þétta innsigli.

Hitaþéttingar eru fullkomnari og veita lengri endingartíma með minni uppgufunarhraða samanborið við hefðbundna límþéttingu. Þessi valkostur hentar vel ef þú vilt geyma sýni til langs tíma, þó að þetta feli í sér viðbótarþarfir fyrir plötuþéttibúnað.

Hvernig á að innsigla PCR-plötu

Aðferð við þéttingu plötunnar

Sjálflímandi

1. Gakktu úr skugga um að þú vinnir á sléttu og stöðugu vinnusvæði

2. Taktu filmuna úr umbúðunum og fjarlægðu bakhliðina.

3. Setjið innsiglið varlega á plötuna og gætið þess að allir holurnar séu þaktar.

4. Notið áhald til að beita þrýstingi yfir plötuna. Byrjið frá öðrum endanum og þrýstið jafnt yfir í hinn.

5. Endurtakið þetta nokkrum sinnum

6. Renndu sprautunni meðfram ytri holunum til að ganga úr skugga um að þær séu einnig vel innsiglaðar.

Hitaþéttingar

Hitaþéttingar virka þannig að filman bræðast við brún hvers hols með hjálp plötuþéttitækis. Til að nota hitaþéttitæki skal vísa til leiðbeininga frá framleiðanda búnaðarins. Gakktu úr skugga um að framleiðandinn sem þú kaupir búnaðinn frá sé virtur, þar sem það er mjög mikilvægt að þéttingin sé rétt, virk og vatnsþétt.

Helstu ráðleggingar um þéttingu platna

a. Þegar þrýst er á þéttinguna skal fara bæði lárétt og lóðrétt til að tryggja rétta þéttingu.

b. Það er alltaf góð venja að prófa hvað sem er gert, og þetta er engin undantekning með plötuþéttingu. Prófið með tómri plötu áður en þið notið hana með sýnum.

c. Þegar þú prófar skaltu taka innsiglið af og athuga hvort límið festist rétt, án bila. Þetta er myndræn framsetning í fyrsta viðmiðunarskjalinu. Ef þú hefur ekki innsiglað plötuna rétt, þá munu myndast bil þar sem límið hefur ekki tengst plötunni að fullu þegar þú fjarlægir innsiglið.

d. Við sendingu og flutning sýna gæti verið gagnlegt að setja plastinnsigli ofan á álinnsiglið til að auka vörn (sérstaklega gegn götum).

e. Gætið þess alltaf að engar ójöfnur eða hrukkur séu til staðar þegar filman er sett á – það veldur leka og uppgufun.